血小板在离体保存过程中结构和功能会随时间延长而发生形态和功能的变化,这些改变统称为储存损伤(Platelet Storage Lesion,PSL)[1]。现在临床使用的血小板制剂在22℃振荡保存常规条件下最长可以保存5天。为了减少血小板的储存损伤,延长血小板保存时间,人们尝试采用低温保存方法,它虽可以延长保存时间,但低温也可致血小板发生活化,使血小板功能减低并导致其在受者体内很快被清除[2]。研究表明,海藻糖能抑制血小板的储存损伤并且减少凋亡的发生[3-5],其具体机制还有待进一步阐明。微小RNA(micro RNA,miRNA)是由内源基因编码而成的一种小分子非编码RNA(Small non-coding RNAs,snc RNAs),长度约为21~22个核苷酸的单链RNA分子,主要功能是靶向抑制特异的信使RNA(mRNA)参与胞内的调控过程,参与机体的多种生物学过程[6-8];血小板虽为无核的细胞,但其胞内含有丰富的miRNA[9],在血小板储存损伤的过程中起重要作用[10,11]。血小板miRNA与储存损伤的研究多基于PCR或者芯片方式[12],本研究首次使用第二代高通量测序技术,通过检测海藻糖低温保存血小板时的miRNA表达改变,为进一步探索海藻糖保护低温血小板的分子机制提供理论基础。目的 探讨海藻糖低温保存血小板过程中miRNA变化。方法 收集3份来自相同血型无偿献血者的单采血小板,混匀后,第一次对照组:新鲜血小板组(22℃,100%血浆储存的血小板2h);实验组:海藻糖低温保存血小板组(10℃,70%海藻糖保存液储存5 d)。第二次实验对照组:添加70%未加入海藻糖的血小板添加液10℃震荡保存5天;实验组:添加70%海藻糖保存液10℃震荡保存五天。采用高通量测序方法对两组样品进行了小RNA测序,进行生物信息分析,主要包括已知miRNA鉴定、miRNA差异表达分析及富集分析。结果 2组样品经测序后,平均每个样品获得了11兆净读值(Clean reads),通过差异表达分析,海藻糖低温保存前后比较,在已知的miRNA中共有460个差异表达miRNA,其中有统计学意义差异表达已知miRNA共44个,分别在钙离子通路、MAPK通路、凋亡路径、轴突导向等储存损伤相关路径中富集程度较高。相对于对照组,实验组中hsa-miR-4449、hsa-miR-1296表达显著上调(p值<0.05,且差异倍数≥2),hsa-miR-665表达被抑制。低温保存血小板过程加入海藻糖后,多个储存损伤相关信号通路出现差异,包括MAPK通路、光传导通路、p53信号通路、VEGF信号通路、流感A通路、凋亡路径等。其中多种相关miRNA表达出现改变,如hsa-miR-2277-5p上调,hsa-miR-4707-3p、hsa-miR-136-3p和hsa-miR-431-3p显著上调,hsa-miR-188-5p表达下调,hsa-miR-28-5p表达显著下调。结论 血小板经过海藻糖低温保存后的miRNA呈现出特征性表达变化,提示海藻糖通过hsa-miR-2277-5p、hsa-miR-4707-3p、hsa-miR-188-5p、hsa-miR-28-5p调控蛋白激酶B(Akt)表达增加,Bcl-2、IAP、MKP显著增加;Bax表达下降,Fas L和蛋白激酶(PKC)显著下降,参与低温时对血小板储存损伤的保护作用,p38MAPK与海藻糖低温保护血小板有密切关联。