【摘 要】
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目的胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)是星型胶质细胞分化及活化等重要生物过程中的特征性标记物,但其转录调控的机制仍不清楚。本文首次探讨了星型
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目的胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)是星型胶质细胞分化及活化等重要生物过程中的特征性标记物,但其转录调控的机制仍不清楚。本文首次探讨了星型胶质细胞分化及活化过程中Pax3在大鼠胶质纤维酸性蛋白(GFAP)基因转录调控中的作用,为星型胶质细胞分化及活化过程中GFAP基因表达的调控机制提供新的内容。方法通过生物信息学预测大鼠GFAP基因启动子上Pax3的转录结合位点,根据预测GFAP基因启动子上Pax3的转录结合位点设计EMSA探针序列,体外EMSA检测两者的结合,并用Luciferase Assay检测Pax3对GFAP基因的转录调控活性;建立神经干细胞向星型胶质细胞分化及LPS刺激星型胶质细胞活化模型,应用ICC、RT-PCR检测Pax3与GFAP在分化过程中表达水平的相关性;ChIP进一步验证Pax3在星型胶质细胞分化过程中的能与GFAP启动子相应区域特异性结合;通过腺病毒系统使神经干细胞和星型胶质细胞过表达及失表达Pax3,利用ICC检测其对星型胶质细胞分化及活化的影响以及对GFAP表达的效应。结果体外EMSA证明Pax3能与GFAP启动子区域序列结合,Luciferase Assay检测到Pax3对GFAP基因具有负转录调控活性;ICC,RT-PCR等实验结果表明星型胶质细胞分化及活化模型中Pax3与GFAP表达水平负相关;ChIP进一步验证Pax3在星型胶质细胞分化前后能与GFAP启动子相应区域特异性结合;过表达Pax3能抑制神经干细胞的分化和星型胶质细胞的活化,并抑制GFAP的表达,干扰Pax3表达能促进神经干细胞向星型胶质细胞分化以及星型胶质细胞的活化并促进GFAP的表达。结论大鼠神经干细胞分化过程及LPS刺激星型胶质细胞活化模型中,Pax3对GFAP基因的转录起负性调控作用。
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