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[背景]藤黄酸(GA)作为新近发现的天然抗肿瘤药物,在膀胱癌中显示了强有效的抗癌作用,极具临床应用前景,阐明其作用机制已成为其临床应用的研究重点。长链非编码RNA (LncRNA)过去被视为基因组转录的“噪音”,近年研究发现LncRNA参与生物调节的各个环节,其表达异常与多种疾病的发生、发展密切相关。LncRNA GAS5在多种肿瘤中低表达,被认为是重要的抑癌基因,但GAS5与膀胱癌发生、发展之间的关系仍不明确,作用机制也有待深入研究。[目的]1.检测长链非编码RNA GAS5在膀胱癌中的表达情况,分析其与膀胱癌临床分级、分期之间的关系；2.探讨GAS5在膀胱癌中的作用并阐述其作用机制；3.进一步完善新型化疗药GA抑制膀胱癌的作用机制。[方法]1.收集至我院行膀胱癌根治性切除术的病例43例,同时获取癌组织与周围正常组织,提取RNA行RT-QPCR实验检测长链非编码RNA GAS5的表达水平,并分析GAS5的表达与临床分级、分期之间的关系；2.分别合成GAS5 siRNA与shRNA沉默GAS5,构建GAS5过表达载体(GV144-GAS5)过表达GAS5,分别转染膀胱癌细胞株T24、EJ；3.GAS5在膀胱癌细胞中的作用：MTT检测细胞生存率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测蛋白表达水平；4.双荧光素酶报告基因检测GAS5对EZH2启动子活性的影响；5.RIP实验检测GAS5与转录因子E2F4的结合作用；6. CHIP实验检测E2F4与EZH2启动子的结合作用；7.构建EZH2过表达载体与shRNA载体,转染T24、EJ细胞,RT-QPCR实验检测EZH2对miR-101的调节作用；8.双荧光素酶报告基因检测EZH2对miR-101的启动子活性的影响；9.不同浓度(0、1.5、2.0、2.5 μM)GA分别作用于T24、EJ细胞,RT-QPCR检测GA对GAS5的调节作用：10.沉默GAS5前后,分别用MTT、流式、Western blot检测GA对膀胱癌细胞的作用：11. balb-c裸鼠构建膀胱癌异位移植模型,检测GA通过GAS5体外抑制膀胱癌生长。[结果]1.43例膀胱癌标本中33例GAS5表达下调(76.74%)；非基层浸润性膀胱癌(Ta+Tis+T1)中下调率为59.09%,浸润性癌中下调率为95.24%；无淋巴结转移的下调率为78.57%,有淋巴结转移的下调率为75.86%；无远处转移的下调率为77.5%,有远处转移的下调率为66.67%。2.过表达GAS5后膀胱癌细胞增率下降,凋亡率上升,caspase-3蛋白活活化增加：沉默GAS5后膀胱癌细胞增值率上升,凋亡率下降,caspase-3蛋白活化减少。3. Western blot显示GAS5能够抑制EZH2蛋白的表达,RT-QPCR显示GAS5能够抑制：EZH2 mRNA的表达,双荧光素报告基因检测提示GAS5能够抑制EZH2启动子的活性。4.RIP实验提示GAS5能与转录因子E2F4特异性的结合,CHIP实验提示E2F4能够特异性的结合到EZH2启动子区域。5. RT-QPCR提示EZH2能够抑制miR-101的表达,双荧光素报告基因检测提示EZH2能够抑制miR-101-2启动子的活性。6.GA能够正性调节GAS5的表达,且呈剂量正相关性；GA能够显著诱导膀胱癌细胞的凋亡,沉默GAS5后GA诱导膀胱癌细胞凋亡的能力显著下降。7.动物实验显示GA、GAS5均能够显著抑制膀胱癌的生长；沉默GAS5后,GA抑制膀胱癌生长的能力显著下降。[结论]1.GAS5在膀胱癌组织中显著低表达,且肌层浸润性膀胱癌中低表达率明显高于非基层浸润性膀胱癌,其表达水平与淋巴结转移、远处转移无明显关系;2.膀胱癌中,EZH2可以从转录水平负性调节miR-101的表达；3.GAS5可以通过转录因子E2F4抑制EZH2启动子活性,抑制EZH2 mRNA、蛋白的表达,进而促进miR-101的表达,诱导膀胱癌细胞凋亡;4.GA通过GAS5阻断EZH2-miR-101通路促进体内外膀胱癌细胞凋亡。