论文部分内容阅读
迄今,作为果树栽培的樱桃主要有甜樱桃(Prunus avium Linn)、中国樱桃(Prunus pseudocerasus Lindl)、酸樱桃(Prunus cerasus Linn)和毛樱桃(Prunus tomentosaThunb)。在我国用于经济栽培的主要是中国樱桃和甜樱桃,它们同属于蔷薇科李属樱桃亚属,但中国樱桃的大多数品种表现自交亲和性,而甜樱桃大部分品种表现自交不亲和性。本论文针对甜樱桃和中国樱桃的自交(不)亲和性,开展了授粉生物学和分子生物学方面的研究,主要研究结果如下:1、甜樱桃和中国樱桃授粉亲和性存在差异:以‘莫利’、‘拉宾斯’(甜樱桃)和‘垂丝’、‘东塘’(中国樱桃)为试材,分别于自花、异花授粉后不同时间切取花柱,用FAA固定,荧光染色后压片观察,分析其花粉原位萌发率和花粉管生长情况。实验结果表明:中国樱桃表现自交亲和性,而甜樱桃除人工诱变导致自交亲和的拉宾斯等品种外,表现典型的植物配子体自交不亲和性。2、蕾期授粉和延迟授粉对甜樱桃自交不亲和性程度有影响:选用自交不亲和性程度不同的两个甜樱桃品种‘莫利’和‘拉宾斯’为试材,分别在其开花前、开花当天和开花后进行莫利自花、拉宾斯自花和‘莫利×拉宾斯’异花授粉,并于授粉后12、24、48、72和96小时(h)切取花柱,用FAA固定,荧光染色后压片观察。实验结果表明:甜樱桃自花授粉结籽程度与其雌蕊的发育程度密切相关,蕾期授粉和延迟授粉都能够在一定程度上克服甜樱桃的自交不亲和性,但蕾期授粉的作用更加明显。3、鉴定出了部分甜樱桃品种的S基因型:利用通用引物和特异引物PCR来扩增S等位基因,最终确定了21个甜樱桃品种的S基因型,其共涉及6个S基因,分别为S1、S2、S3、S4、S6和S9。4、中国樱桃S-RNase基因PCR体系的建立:以中国樱桃‘泰山红樱’DNA为模板,采用李属通用引物C2/C5,进行PCR扩增,通过对Mg2+,dNTP,引物,模板DNA,TaqDNA聚合酶浓度等反应参数的系统研究,建立中国樱桃S-RNase基因特异PCR扩增体系。结果表明,该体系具有良好的稳定性,并获得理想的扩增效果。5、中国樱桃S-RNase基因的鉴定和氨基酸序列分析:通过特异PCR、克隆和测序,从10个中国樱桃品种中共分离出6个S-RNase基因片段,命名为S1-S6,基因片段大小在504 bp-1608 bp间,除S1外,其余S等位基因均为新基因。氨基酸序列同源性分析和系统进化树分析都表明,中国樱桃S-RNase与樱花和扁桃的S-RNase相似性高。