论文部分内容阅读
目的：在小鼠肾脏缺血再灌注损伤(Ischemia Reperfusion Injury,IRI)模型中探究刺芒柄花素(Formononetin，FMN)对肾功能及组织结构的保护作用,并明确Toll样受体4(Toll-like receptor4，TLR4)和高迁移率族蛋白B1(High Mobility Group box-B1,HMGB1)在肾脏局部的表达及其在缺血再灌注损伤中的变化，并探究FMN的肾脏保护机制,为其临床应用提供理论依据。 方法：(1)选择22-26g雄性BALB/c小鼠48只,随机分组，即IRI组, FMN组, sham组,其中，IRI组又分为术后12、24、48、72h检测组；FMN组分为低、中、高剂量组，每组6只。(2)建立左侧肾蒂夹闭模型,sham组仅游离左侧肾蒂而不结扎。于术后12、24、48、72h检测IRI组小鼠肾组织形态和血清肌酐及尿素氮水平的变化，据此确定最佳检测时间。(3)根据参考文献,FMN组于手术前30min分别给予尾静脉注射FMN3、15、30mg/kg，通过HE染色及血生化测定指标确定FMN的最适浓度。(4)比较最适剂量FMN组、IRI组及sham组(IRI组及sham组均尾静脉注射等量DMSO)在术后最佳检测时间的肾组织形态功能变化，细胞凋亡情况及TLR4、HMGB1水平改变。(5)应用SPSS18.0软件统计并分析实验结果。 结果：(1)成功制备了小鼠肾IRI模型,根据查阅相关文献及前期大量预实验，将肾组织缺血时间定为45min。(2)肾组织IRI后，血肌酐和血尿素氮值随时间推移持续升高，在24h达到顶峰(肌酐119.81±5.19μmol/L，尿素氮50.34±2.08mmol/L，p<0.01)，然后逐渐下降。肾缺血前30min给予不同剂量FMN，肾脏IRI有不同程度的改善，以中剂量组最为显著(肌酐27.84±8.33μmol/L，尿素氮18.61±2.78mmol/L，p<0.01)。(3)光镜下可看到，肾脏IRI导致肾脏严重受损，肾小管腔扩张，肾小管上皮细胞扁平且在24h最为显著；sham组肾组织基本无病理学变化，遂将术后24h定为最佳检测时间。缺血前30min给予低剂量FMN，肾脏IRI无明显减轻，中剂量FMN能显著减轻肾组织IRI,高剂量FMN对肾脏也有一定的保护作用，故中剂量(15mg/kg)为最适浓度。(4)与sham组相比，术后24h，肾组织IRI导致肾脏TUNEL阳性细胞增多，可见明显的细胞凋亡(p<0.05)。缺血前30min尾静脉注射FMN15mg/kg，肾脏细胞的凋亡与IRI组相比明显减少(p<0.05)。(5)肾脏IRI前，TLR4及HMGB1表达较少。IR损伤24h后，TLR4及HMGB1蛋白表达于sham组相比升高(p<0.05)，缺血前给予15mg/kgFMN，TLR4及HMGB1蛋白表达与IRI组相比显著减弱(p<0.05)。 结论：FMN预处理可减轻肾脏缺血再灌注损伤，具有肾脏保护作用；HMGB1可能参与肾脏缺血再灌注后的损伤过程；FMN预处理能够降低TLR4及HMGB1的表达，这可能是其发挥抗肾脏缺血再灌注损伤作用的机制之一。