【摘 要】
：
泛素化系统降解蛋白的靶蛋白技术是直接利用生物体内的泛素-蛋白酶体系统来降解蛋白。该技术能在十几分钟内快速去除内源蛋白质,用此系统来研究蛋白功能,可能比传统的基因编辑技术更准确。已知Trim21与Smurf都是E3泛素连接酶,其中Trim21与抗体的Fc段结合后招募泛素-蛋白酶体系统,而Smurf具有一个C末端Hect结构域,Hect结构域的氨基末端参与了E2的结合。所以我们选用这两个E3泛素连接酶
论文部分内容阅读
泛素化系统降解蛋白的靶蛋白技术是直接利用生物体内的泛素-蛋白酶体系统来降解蛋白。该技术能在十几分钟内快速去除内源蛋白质,用此系统来研究蛋白功能,可能比传统的基因编辑技术更准确。已知Trim21与Smurf都是E3泛素连接酶,其中Trim21与抗体的Fc段结合后招募泛素-蛋白酶体系统,而Smurf具有一个C末端Hect结构域,Hect结构域的氨基末端参与了E2的结合。所以我们选用这两个E3泛素连接酶基因,建立泛素化系统降解果蝇早期胚胎中目标蛋白的技术。同时构建新Gal4果蝇tub67c P-gvp,如此技术建立成功,就运用tub67c P-gvp果蝇启动泛素化系统在早期胚胎的较后期表达。我们分别构建Trim21、Smurf与纳米抗体片段Vhh的重组质粒,通过显微注射WT果蝇胚胎获得Trim21和Smurf-Hect转基因的果蝇品系。然后,通过一系列果蝇杂交,拿到同时带有转基因表达和需要降解的靶蛋白杂合与纯合的果蝇,通过Western blot与免疫荧光实验来确定泛素化系统对果蝇卵巢中目标蛋白的降解情况。最后,对果蝇的表型进行观察。实验证明转基因果蝇建系成功,但该系统对靶蛋白没起到降解作用,所以我们又直接在果蝇胚胎里注射GFP抗体,实验表明还是没有明显效果。从实验结果来看,此次建立的泛素化系统对果蝇早期胚胎中目标蛋白没有降解作用。我们猜测,此研究中果蝇泛素化转基因系统可能存在其他问题,需要进一步的研究。
其他文献
兜兰属（Paphiopedilum）为兰科植物中极具特色的一个类群,其花型别致、色系丰富、花期较长,是最具市场开发前景的兰花。然而,兜兰属植物开花调控机制不清,开花时间难以精确控制是限制其规模化栽培的重要因素。因此,开展兜兰属植物成花诱导的关键调控途径和主要调控因素的研究有十分重要的意义。兜兰属植物的自然花期多在春季（即春花型）或秋季（秋花型）。本论文以春季开花的德氏兜兰（P.delenatii）
烟草是云南省的一种重要的经济农作物,作为一种固定生物,作物容易遭受生物胁迫和非生物胁迫等环境因子的侵害,严重影响了烟草的经济效益。植物通过蔗糖转化酶（invertase,INV）将蔗糖分解为葡萄糖和果糖,为植物提供生长发育的能源物质,以及作为与外界环境反应的信号因子,因此与植物的抗逆性密切相关。蔗糖转化酶（INV）根据最适p H值,分为酸性转化酶（Acid invertase,AI）和碱性/中性转
紫色紫孢菌（Purpureocillium lavendulum）是紫孢属（Purpureocillium）中报道的一种不同于淡紫紫孢菌（Pur.lilacinum）的新种。近年来微生物资源防治植物病原线虫的研究、开发备受重视,根据文献报道,紫孢属是目前最有潜力的生物防治植物寄生线虫的真菌之一,而紫色紫孢菌作为一种广谱性很强的生防菌,其生物防治机理已有较好的研究基础,但其次级代谢产物在防治病害方面
目的:对不同手针流派的基础理论、针刺方法及优势病种进行归纳比较,提供不同手针流派的区别,促进手针疗法的应用与发展。方法:本文以“手针”“手针疗法”“手穴”为关键词对各电子数据库进行检索。主要以手针著作为切入点开展研究,因著作中手针相关信息记载详细,期刊文献虽不能反应全貌,但亦可作为补充材料进行研究。对历史上与手针疗法相关的书籍及期刊文献进行整理,力求完整全面,将其资料收集汇总,建立“手针流派数据库
脂质作为一种能量物质在生物体的生命活动中扮演着十分重要的角色,脂质结构和种类十分多样,以多种方式参与到各种膜的构成中,并作为大分子的一部分参与到细胞的信号转导以及其他生物学功能。脂质代谢与氨基酸代谢有着密切的联系,脂质代谢的中间产物可以作为氨基酸合成的底物。脂质代谢紊乱与众多代谢性疾病有着密切的联系,如肥胖、心血管疾病,非酒精性脂肪肝等。在翻译过程中氨酰t-RNA合成酶（ARSs）识别相应的氨基酸
阿尔兹海默病（Alzheimer’s disease,AD）是神经退行性疾病的代表性疾病,病人会表现出痴呆的症状并最终丧失个人生活的能力。相关研究表明,淀粉样蛋白的异常聚集及聚集体诱导的神经细胞死亡是AD的主要病因。充分理解淀粉样蛋白的错误折叠和聚集机理对于AD乃至其他神经退行性疾病的分子机制及治疗药物的开发研究有着十分重要的意义。一些体内及体外实验表明,不同种类的淀粉样蛋白之间会相互作用影响淀粉
SARS-Co V-2（Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2）的全球大流行已经严重影响了人类的生命健康和经济发展,但是其确切起源目前仍不清楚。SARSCo V-2感染人类的前提是进化出对人类细胞受体血管紧张素转换酶2（Angiotensinconverting enzyme 2;ACE2）的高结合亲和性。蝙蝠种群中存在大量的SARS-lik
蛋白质翻译过程是中心法则的关键步骤之一。翻译分为起始、延伸、终止和回收四个阶段,最终合成与m RNA上开放阅读框核酸序列对应的蛋白质序列。经典的翻译调控研究通常只针对某一个或几个基因,缺乏在基因组层面上的认识。近年来开发出来的核糖体印迹测序技术（ribosome profiling或Ribo-seq）能在全转录组水平上考察生物体内翻译状况。通过对核糖体保护片段进行高通量测序,能够获得核糖体在转录本
半夏是天南星科多年生草本植物,以块茎入药,具有镇咳祛痰、抗生育、抗心律失常、止呕和抗肿瘤等多种药理作用。多糖作为半夏的主要活性成分之一,在抗肿瘤方面具有显著的研究意义。在本研究中,我们从半夏的干燥块茎中分离纯化出一种多糖级分（PTP）,研究了其结构和抗肿瘤活性,并进一步研究了其诱导人肝癌细胞Hep G2凋亡的凋亡机制。以半夏干燥块茎粉末为原料,通过热水（80℃）浸提,乙醇沉淀,除淀粉,Sevag法
近年来,随着细菌耐药性问题益发严重,超级细菌对人类健康造成了巨大威胁,引起了国内外的广泛关注。在这种严峻的形势下,寻找新的治疗感染策略以替代传统抗生素刻不容缓。氨基酸或肽基超分子水凝胶具有成本低、生物相容性高,载药能力高、结构多样性等优点,因而受到越来越多的关注。本文以Fmoc-氨基酸作为基本单元,运用超分子自组装技术,成功制备了具有良好抗菌活性的水凝胶。（1）四种Fmoc-氨基酸抗菌水凝胶的制备