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rLj-RGD3是一种来源于七鳃鳗口腔腺的重组蛋白。本课题组在前期工作中已经证明了rLj-RGD3具有强效的抗血管新生、抗血栓以及抗肿瘤活性,且已经成功确定了rLj-RGD3的纯化工艺。为进一步评价其抗肿瘤的药理药效学作用,本论文将对rLj-RGD3作用于喉癌上皮细胞Hep2的体内外生物学活性进行研究,并对其分子机制进行探讨。通过MTT法确定了rLj-RGD3抑制Hep2细胞的增殖能力,其半数致死浓度为1.23μM。通过形态学观察、DNA Ladder、流式细胞术、TUNEL以及Hochest 33258染色等研究方法,证实了rLj-RGD3能够诱导喉癌上皮细胞Hep2凋亡,且凋亡细胞数呈剂量依赖性方式增长。接下来,本论文通过划痕实验、细胞骨架形态学观察实验、Transwell迁移和侵袭实验证明了rLj-RGD3能够在体外环境中通过破坏细胞骨架从而有效抑制Hep2细胞的迁移和侵袭能力。Western Blot结果表明rLj-RGD3处理组Hep2细胞中活化的Caspase-9、3和7,切割失活的PARP以及Bax的含量显著增加,而活化的Caspase-8和Bcl-2的含量却没有发生明显的变化。除此之外,rLj-RGD3还能明显地下调Hep2细胞内磷酸化蛋白激酶B、磷酸化黏着斑激酶、磷酸化磷酸肌醇特异性磷脂酶C以及桩蛋白的水平,并同时上调p-p38的水平。这意味着rLj-RGD3能够通过内源性途径以及整合素相关信号通路分子作用于Hep2细胞。为了研究rLj-RGD3在小鼠体内的抗肿瘤活性,本论文建立了BALB/c裸鼠移植瘤模型。实验结果表明,rLj-RGD3对Hep2移植瘤具有显著的抑制作用,且没有毒性。综上,rLj-RGD3对喉癌上皮细胞Hep2在体外和荷瘤小鼠体内实验中均具有显著的抑癌作用。因此,rLj-RGD3有望成为一种新型的抗肿瘤药物,期待其在肿瘤的前期治疗和术后转移的预防中取得不俗的效果。