星形胶质细胞基因表达谱差异及其对损伤反应的研究

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星形胶质细胞是中枢神经系统中一种主要的胶质细胞类型。它们对于维持神经元周围的环境至关重要,星形胶质细胞行为的异常改变可以引起神经元的功能障碍。新近研究表明:星形胶质细胞不仅具有营养和保护神经元的作用,而且参与神经系统的高级功能活动。 星形胶质细胞发生分化的“双谱系学说(T1A谱系和O-2A谱系)”将星形胶质细胞分为1型星形胶质细胞(type-1 astrocytc,T1A)和2型星形胶质细胞(type-2 astrocyte,T2A)。两型星形胶质细胞分别由两种不同抗原表达的祖细胞发育分化而来:T1A起源于抗原表型为Ran-2~+、A2B5~-的T1A前体细胞;T2A和少突胶质细胞(oligodendrocyte,OL)起源于抗原表型为Ran-2~-、A2B5~+的双潜能细胞—O-2A祖细胞(oligodendrocyte-type 2 astrocyte progenitor cells)。研究表明,T1A和T2A在发生时间、细胞形态及功能等方面均存在差异。我们实验室的研究发现,T1A和T2A在分化过程中,细胞骨架蛋白vimentin和钙结合蛋白S-100β的抗原表达存在差异。 目的 探讨稳定的分离纯化O-2A谱系细胞的方法,以获得纯化的T2A培养;比较T1A和T2A发生及分化过程中基因表达谱差异;研究不同型别星形胶质细胞损伤后的反应差异。 方法 根据T1A、O-2A谱系细胞的发生分化对间和生长速率的差异及细胞粘附特性的不同,采用振荡法和差速消化法,并结合使用富含血清的培养基,分离纯化T2A;应用基因芯片技术比较纯化培养的T1A和T2A基因表达谱差异;在无血清培养中,建立混合胶质细胞机械损伤模型,观察T1A和T2A在损伤后的不同反应。 结果 (1)分化成熟的T2A,胞体较大,折光性弱,胞核偏向一侧,可见一个核仁,从胞体上伸出许多细长的突起,由突起上再发出更为细小的分支,GFAP和A2B5免疫标记,胞体和突起均呈阳性反应;(2)基因芯片结果显示,267条基因在T1A和星形胶质细胞基因表达谱差异及其对损伤反应的研究中文摘要TZA中存在表达差异,其中113条在TIA中高表达,154条在几A中高表达;(3)机械损伤后,底层的TIA胞体延长,向损伤区域伸出‘伪足样”突起,胞体不发生迁移,而上层的O一ZA祖细胞向损伤区域迁移,并发生分,七改变,形成TZA。 结论(l)采用振荡法和差速消化法,并结合使用富含血清的培养基,建立了分离纯化几A的方法;(2) TIA和TZA的基因表达存二生差异,提示两型星形胶质细胞具有某些不同的生物学功能;(3) TIA和几A以不同的方式参与损伤后反应,提示两者在损伤后的胶质修复中发挥不同的作用。
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