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第一部分PARP-1抑制剂对骨肉瘤细胞增殖凋亡的影响目的探讨PARP-1抑制剂3-aminobenzamide(3-AB)对骨肉瘤细胞U20S及MG63增殖及凋亡的影响。方法1.用含10%胎牛血清的McCoy’s 5a Medium Modified培养基培养U20S细胞,含10%胎牛血清的DMEM培养基培养MG-63细胞,铺满瓶底后传代；2.将U20S细胞种于96孔板,设6组：空白组、对照组、5 mM 3-AB刺激组、10 mM3-AB刺激组、15 mM 3-AB刺激组、20mM 3-AB刺激组,每组4个复孔,种3块板,分别给予刺激24、48、72 h,按CCK-8法检测细胞增殖,计算抑制率；3.将MG-63细胞种于96孔板,设5组：空白组、对照组、5 mM 3-AB刺激组、10 mM3-AB刺激组、20mM 3-AB刺激组,每组4个复孔,种3块板,分别给予刺激24h、48h、72 h,按CCK-8法检测吸光度值,计算细胞增殖抑制率；4.将U20S细胞种于6 CM培养皿中,接种6个皿,其中3皿作为对照组给予完全培养基培养,另3皿在培养基中加入10mM的3-AB,分别在培养24h、48h、72h后每组各取一皿,按Annexin V-FITC凋亡试剂盒说明书操作,上流式细胞仪测凋亡率；5.将MG-63细胞种于6 CM培养皿中,接种8个皿,其中2皿作为对照组给予完全培养基培养,另6皿在培养基中分别加入5mM、10mM、20mM的3-AB,在培养24h、48h后每组各取一皿,按Annexin V-FITC凋亡试剂盒说明书操作,上流式细胞仪检测细胞凋亡率；6.将U20S细胞种于6CM的培养皿中,接种4个皿,其中一皿作为对照组,另三皿分别给予10mM的3-AB刺激8h、12h、24h后,按caspase-3活性测定试剂盒说明书提取蛋白测定caspase-3的活性；7.将U20S细胞种于6CM的培养皿中,接种4个皿,一皿作为对照,给予完全培养基培养,另三皿培养基中加入10mM的3-AB,分别培养24h、48h、72h后提取细胞总蛋白,Western-blotting检测Bcl-2、Bax的表达。结果1.3-AB抑制骨肉瘤细胞U20S的增殖,抑制率随3-AB浓度的升高而升高,随时间的延长而升高；2.3-AB抑制骨肉瘤细胞MG-63的增殖,抑制率随3-AB浓度的升高而升高,随时间的延长而升高；3.3-AB促进骨肉瘤细胞U20S的凋亡,凋亡率随3-AB刺激时间的延长而升高；4.3-AB促进骨肉瘤细胞MG-63的凋亡,凋亡率随3-AB浓度的升高而升高,随时间的延长而升高；5.3-AB刺激8h、12h后caspase-3活性增加,差异有显著性,24h后caspase-3活性与对照组比较无显著性差异；6.3-AB刺激24h、48h、72h后,Bax表达量逐渐升高,Bcl-2表达量则在24h及48h轻度升高,72h降低。结论PARP-1抑制剂3-AB能抑制骨肉瘤细胞的增殖,促进其凋亡。第二部分PARP-1抑制剂对骨肉瘤细胞侵袭的影响目的探讨PARP-1抑制剂3-aminobenzamide(3-AB)对骨肉瘤细胞U20S迁移及侵袭的影响。方法1.常规培养U20S细胞,铺满瓶底后传代；2.将U20S细胞种于6孔板中,待细胞铺满孔底后用枪头在孔板底划三道划痕,PBS冲洗三次,然后将孔分为3组,分别给予完全培养基、含5mM 3-AB的培养基和含10mM 3-AB的培养基继续培养,24h后观察细胞迁移的距离；3.将U20S细胞分为两组,一组为对照组,给予完全培养基培养,另一组给予10mM3-AB处理24h,然后将细胞消化后重悬于含0.1%BSA的无血清培养基中,加入铺好matrigel的Transwell小室的上室,下室加入完全培养基,24h后棉棒除去基质胶,染色,显微镜下观察穿过膜的细胞数。结果1.3-AB刺激后较对照组细胞迁移距离降低,且随3-AB浓度增加,迁移距离降低越明显,差异有显著性；2.3-AB刺激后较对照组细胞穿过基底膜数量减少,差异有显著性。结论PARP-1抑制剂3-AB能抑制骨肉瘤细胞的迁移及侵袭能力。第三部分PARP-1抑制剂联合顺铂对骨肉瘤细胞的影响目的探讨PARP-1抑制剂3-aminobenzamide(3-AB)联合顺铂对骨肉瘤细胞U20S生长的影响。方法1.常规培养U20S细胞,铺满瓶底后传代；2.将U20S细胞接种于两块96孔板中,分为顺铂处理板及顺铂联合3-AB处理板,每板设七组,分别为空白组、对照组、0.5μg/ml顺铂加或不加3-AB组、1.0μg/ml顺铂加或不加3-AB组、1.0μg/ml顺铂加或不加3-AB组、2.0μg/ml顺铂加或不加3-AB组、2.5μg/ml顺铂加或不加3-AB组,分别在刺激48h后用CCK-8法测吸光度值,并计算细胞存活率；3.将U20S细胞接种于6CM皿中,接种12个皿,分为4组：阴性对照组、3-AB处理组、顺铂处理组、3-AB联合顺铂处理组,每组3皿,分别在培养24h、48h、72h后收集细胞,PI染色,上流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期的变化。结果1.单纯顺铂处理及与3-AB联合处理后细胞的存活率均随顺铂浓度的增高而逐渐降低,单纯顺铂处理IC50为1.15003,联合刺激组的IC50为0.65254,增敏比为1.76；2.与对照组比较,经单纯3-AB处理,及3-AB与顺铂联合处理后细胞的凋亡率均增加,而3-AB联合顺铂处理后细胞的凋亡率较单纯3-AB及单纯顺铂处理的凋亡率高；3.与对照组比较,3-AB处理组细胞周期无明显改变,顺铂处理组24h后细胞周期呈S期阻滞,而后转为G2/M期阻滞,而3-AB联合顺铂处理组S期阻滞时间更长,持续至72h。结论PARP-1抑制剂3-AB能增强顺铂对骨肉瘤细胞的增殖抑制及促凋亡作用。