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背景和目的：原发性胆汁性肝硬化(Primary biliary cirrhosis. PBC)是一类一种免疫介导的慢性进行性胆汁淤积性肝病,患者肝内汇管区大量CD4+和CD8+为主自身反应性淋巴细胞浸润,导致非化脓性胆管炎,伴随外周血清中出现高滴度抗线粒体抗体(Anti-mitochondrialantibodies, AMA)、胆汁淤积相关的生化指标升高,并有外周血淋巴细胞亚群和多种细胞因子的变化,自身反应性T细胞,因而免疫系统异常在PBC发病中具有重要作用,但其机制尚不完全清楚。同时,目前PBC诊断主要依赖于外周血AMA抗体和肝脏病理。虽然AMA对于PBC诊断敏感性达高达90%,但该抗体也可存在于其他自身免疫病,特异性不高,而PBC患者中也常常存在AMA阴性者；其次,该抗体也与疾病活动程度、预后无相关性；再者,对于早期肝脏生化指标正常但AMA阳性的患者或者AMA阴性但胆管酶增高的患者,则必须通过肝穿刺才能明确诊断,因较大创伤性、风险及花费常使诊断受到很大限制。因而目前仅血清中特异性自身抗体已经无法满足临床需求,积极寻找与疾病诊断和预后相关的新的疾病标志物,能有助于临床诊断和治疗水平提高。MicroRNA (miRNA)是一类内源性非编码小分子单链RNA,通过与靶基因的信使RN A (messenger RN A, mRNA)结合,促使mRNA降解或抑制其翻译,从而抑制靶基因的表达,广泛参与调控细胞增殖、分化、凋亡和组织器官发育等生物学过程。目前已经证实miRNA与多种疾病的发生发展密切相关。同时由于miRNA片段较小并相对稳定,也可以作为疾病诊断、分型、预后预测以及个体化治疗的生物标志分子。外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC)主要为淋巴细胞等,作为体内免疫系统的关键组成部分,富含miRNA,易取得且分离成本相对低,创伤性小,本研究首先采用高通量miRNA芯片技术筛选PBC患者PBMC中差异性表达的miRNA,并且在大样本PBC患者中行实时定量PCR (Real Time quantitative Reverse Transcription PCR, RT-qPCR)验证,旨在寻找PBC相关特异性miRNA作为新的疾病标志物,并与PBC主要临床指标进行相关性分析,试图寻找miRNA与临床特征的相关性。同时通过靶基因预测、生物信息学分析及文献查阅,了解差异miRNA靶基因可能参与的信号通路。然后挑选PBMC中差异表达miRNA,分别在CD4+T细胞、CD19+B细胞中行RT-qPCR进一步验证,寻找差异表达miRNA,定位差异表达的免疫细胞,检测免疫细胞中(PBMC、CD4+T)靶基因mRNA (AKT3, PDCD4, SP1)表达及通过双荧光素酶报告系统寻找可能发挥调节作用的靶基因。方法：1.通过高通量miRNA表达谱芯片检测4例PBC患者及3例健康对照PBMC中的miRNA表达谱,筛选出PBC患者中差异性表达的miRNA。通过文献检索和生物信息学分析,对芯片中表达差异miRNA,进行靶基因预测及信号通路分析。2.应用RT-qPCR方法验证9个miRNA (miR-21, miR-142-3p, miR-150-5p, miR-155-5p, miR-23a, miR-23b, miR-146a, miR-146b)在50例PBC患者及30例健康对照中的表达情况,分析其表达水平与临床特征及实验室指标的相关性。3.磁珠分选出PBC患者与健康对照PBMC中的CD4+T淋巴细胞、CD19+B淋巴细胞,分别检测不同免疫细胞中miRNA表达。挑选差异miRNA相关的靶基因,检测PBMC及CD4+T细胞中靶基因mRNA表达量和双荧光素酶验证靶基因。结果：1. miRNA芯片在PBC的PBMC中筛选出12个差异性表达的miRNA,其中9个表达上调,3个表达下调。2. Real-time qPCR证实9个miRNA中,miR-155-5p在PBC患者PBMC中表达水平显著低于健康对照,miR-150-5p在PBC患者中表达水平显著高于健康对照,其他统计学差异不明显。miR-155-5p, miR-150-5p可作为PBC新的疾病学标志物。miR-150-5p与PBC患者血清IgA水平呈正相关,差异表达miRNA (miR-150-5p、miR-155-5p)与其他实验室指标未发现统计学相关性。差异miRNAs的受试者工作特征曲线(Receiver operator characteristic curve, ROC曲线),曲线下面积位于0.5-0.7之间,疾病识别能力较低。3.PBC患者miRNA-155-5p在CD4+T细胞与CD19+T细胞中表达差异不明显,PBC患者miR-150-5p在CD4+T细胞中较健康对照显著增高,CD19+B细胞表达差异不明显,miR-150-5p靶基因相关的mRNA (AKT3、SP1、PDCD4)在PBC患者PBMC及CD4+T细胞中表达情况提示,AKT3在PBMC及CD4+T细胞中均较健康对照显著下降。PBC患者PBMC中SPl的mRNA表达量较HC增高,但2组间SP1的mRNA相对表达量在CD4+T细胞中无显著差异。2组间PDCD4的mRNA表达量无显著统计学差异。4.双荧光素酶靶基因验证结果提示AKT3为miR-150-5p的靶基因之一。结论：研究结果表明PBC患者PBMC及CD4+T细胞中同HC相比存在差异性表达的miRNA,可作为新的疾病学标志物并可能与PBC发病机制相关。miR-150可能通过AKT3参与PBC的发病,发病机制的相关性有待进一步研究。