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目的探讨可缓释包裹血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor)的聚乳酸-羟基乙酸共聚物((poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA))纳米粒对帕金森大鼠多巴胺能神经元的保护作用及其机制。方法(1)帕金森大鼠模型建立:新购大鼠饲养1周后,颈部皮下注射阿扑吗啡确认无自发性旋转后用于模型制备。大鼠腹腔注射10%水合氯醛深度麻醉,麻醉平稳后将其俯卧位固定于Korf型大鼠立体定向仪上,头部备皮后剪开皮肤分离皮下组织暴露前囟,以前囟为参考点,确定右侧黑质致密部(SNC):前囟后4.8 mm,矢状缝右1.9 mm,硬膜下7.5 mm和中脑腹侧被盖(VTA):前囟后4.8 mm,矢状缝右1.1 mm,硬膜下8.0 mm。每点注射4 g/L的6-羟基多巴5μL,注射速度1μL/min,注射完毕后留针10min。3周后颈部皮下注射阿扑吗啡(0.25mg/kg)诱导其向健侧旋转,每周筛选1-2次,连续筛选3周,每次时长30分钟并记录结果,旋转圈数大于210圈者为PD模型大鼠。(2)缓释包裹VEGF基因的PLGA纳米粒的制备:采用复乳溶剂挥发法制备包裹VEGF基因的缓释型PLGA纳米粒,并将其制成冻干粉。扫描电镜下观察纳米颗粒的形态,马尔文粒径仪检测纳米颗粒直径、Zeta电位,紫外分光光度法检测包封率。(3)纳米粒的脑内移植:制模成功的PD大鼠模型随机分为五组,空白对照组、1ng/ml尾静脉组、10ng/ml尾静脉组、100ng/ml尾静脉组、立体定位组。空白对照组尾静脉给予0.1M PBS缓冲溶液,第2-4组尾静脉注射给予相对应浓度的包裹VEGF基因的PLGA纳米粒溶液,立体定位组立体注射1ng/ml的包裹VEGF基因的PLGA纳米粒溶液。(4)检测手段:分别于移植后的第7、14、28天,在大鼠颈部皮下注射阿扑吗啡后计数其向对侧的旋转圈数,于治疗后的第28天应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组大鼠体内VEGF的含量,高效液相(HPLC)检测纹状体内多巴胺及其代谢产物高香草酸的浓度,免疫组织化学法观察多巴胺能神经元的表达。(5)统计学方法:所有资料应用SPSS 17.0医学统计软件处理,数据以均数±标准差表示,计量资料采用t检验,p<0.05有统计学意义。结果(1)纳米粒的形态及表征:PLGA包裹VEGF质粒制成纳米粒后,经马尔文粒径仪检测,粒径为220.1±23.2nm,Zeta电位为-18.6±4.2mV;制成冻干粉后于扫描电镜下观测微球形态规则,大小均一;紫外分光光度计法检测包封率为91%。(2)移植后PD大鼠的行为学检测:移植载VEGF基因的PLGA纳米粒PD大鼠旋转次数较空白对照组均减少,其中1ng/ml尾静脉组、立体定位组与空白对照组相比有显著性差异,具有统计学意义(p<0.05)。(3)酶联免疫吸附(ELISA)及高效液相色谱(HPLC):1ng/ml尾静脉组、立体定位组与空白对照组相比有显著性差异,有统计学意义(p<0.05),10ng/ml尾静脉组及100ng/ml尾静脉组虽有改变,但无统计学意义。(4)免疫组化结果示:除空白对照组外,各组TH阳性细胞的数目与移植前相比均增加,以1ng/ml尾静脉组及立体定位组最为显著,其中1ng/ml尾静脉组、立体定位组与空白对照组相比有显著性差异,具有统计学意义(p<0.05)结论(1)PLGA纳米粒介导的VEGF基因对帕金森大鼠多巴胺能神经元具有保护作用。(2)低浓度载VEGF基因的PLGA纳米粒对帕金森多巴胺神经元的保护作用与高浓度相比,效果更为显著。(3)通过对尾静脉组与立体定位组实验结果的比较,证实包载VEGF基因的PLGA的纳米粒可透过血脑屏障,对多巴胺能神经元产生相应的保护作用。(4)静脉注射包载VEGF基因的PLGA纳米粒与立体定位相比安全有效,简单方便,为帕金森病的治疗开辟新的方法。