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促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)是生殖过程中最重要的激素,由下丘脑合成并以脉冲方式释放,诱导促性腺激素——促黄体激素(LH)和促卵泡激素(FSH)的合成和分泌。GnRH信号传递主要依赖三个信号通路:环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)信号通路,肌醇磷脂(phosphoinositide)信号通路,丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)信号通路。
以荷斯坦奶牛子宫为材料,用组织块法在体外培养子宫内膜细胞。采用实时荧光定量PCR研究孕酮和干扰素τ对子宫内膜细胞中GnRH信号传递依赖通路基因mRNA表达的影响。结果如下:
利用组织块法成功培养出奶牛子宫内膜细胞,包括腺上皮细胞和间质细胞,细胞传代可正常生长,且以间质细胞为主。
孕酮和干扰素τ对荷斯坦奶牛子宫内膜细胞的GnRH信号传递依赖通路基因mRNA的表达具有调节作用。孕酮和干扰素τ对Gs mRNA表达起到抑制作用,对照组表达量极显著的高于三个处理组(P＜0.01)。孕酮和干扰素τ对AC mRNA表达起促进作用,四个处理组中,孕酮处理组AC mRNA表达量最高,且显著高于对照组表达量(P＜0.05)。孕酮和干扰素τ对PKAmRNA表达起促进作用,孕酮和干扰素τ处理组PKA mRNA表达量最高,极显著的高于对照组(P＜0.01)。孕酮和干扰素τ对CREB mRNA表达都起促进作用,干扰素τ处理组CREB mRNA表达量最高。干扰素τ处理组和孕酮和干扰素τ处理组的CREB mRNA表达量极显著的高于对照组(P＜0.01)。
孕酮对Gq/11 mRNA表达有显著的促进作用(P＜0.05),而干扰素τ对Gq/11 mRNA表达有显著的抑制作用(P＜0.05)。孕酮和干扰素τ对PLC B mRNA表达起促进作用,干扰素τ处理组PLC B mRNA表达量最高。干扰素τ处理组PLC B mRNA表达量要极显著的高于对照组(P＜0.01),孕酮处理组和孕酮和干扰素处理组表达量显著高于对照组(P＜0.05)。孕酮和干扰素τ对IP3R mRNA表达起促进作用,干扰素τ显著的促进牛子宫内膜细胞IP3RmRNA表达(P＜0.05)。孕酮和干扰素τ对CaM mRNA表达起促进作用,干扰素τ处理组CaM mRNA表达量最高,极显著高于对照组(P＜0.01)。孕酮处理组CaM mRNA表达量显著高于对照组(P＜0.05)。
孕酮和干扰素τ对MEKK mRNA表达起促进作用,干扰素τ处理组MEKKmRNA表达量最高,极显著高于对照组(P＜0.01)。干扰素τ对MKK3/6 mRNA表达起促进作用,孕酮对MKK3/6 mRNA表达没有影响。孕酮和干扰素τ对p38MAPK mRNA表达起促进作用,干扰素τ处理组p38MAPK mRNA表达量最高,其次是孕酮处理组。四个处理组之间,p38MAPK mRNA表达量差异不显著(P＞0.05)。