1,3-甘油二酯的酶法制备及其功效评价研究

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甘油二酯(Diacylglycerol,DAG)是植物油脂中的天然微量成分,是公认安全的食品成分,但其含量通常不足5%。DAG可分为1,2-DAG和1,3-DAG两种同分异构体,二者比例一般为3:7。大量研究表明,1,3-DAG具有抑制脂肪积累、缓解体重增长、改善餐后血脂水平、预防脂肪肝和预防高血脂症及其相关心脑血管疾病等作用。近年来,我国肥胖人群不断增加,1,3-DAG作为能够减少脂肪蓄积、减缓体重增长的功能性健康油脂,受到社会的广泛关注。但目前工业化生产1,3-DAG的方法多为化学法,成本较高且1,3-DAG得率低,还会造成环境污染。若采用酶解法,利用脂肪酶直接催化水解甘油三酯(Triglyceride,TAG),能够显著提高1,3-DAG的得率。但目前尚未发现具有专一性水解TAG Sn-2位酰基能力的脂肪酶。本文选择具有倾向性水解TAG Sn-2位键能力的南极假丝酵母脂肪酶A,研究了一步酶解法制备1,3-DAG的工艺,显著缩短了生产工艺流程,提高生产效率,并采用分子蒸馏法除去产物中的游离脂肪酸和甘油单酯,最后对1,3-DAG的功效进行初步研究。主要研究结果如下:(1)本课题选择高油酸葵花籽油为原料,利用南极假丝酵母脂肪酶A催化水解TAG得到1,3-DAG,考察酶解时间、酶解温度、酶添加量和水添加量对酶解产物中1,3-DAG含量的影响,通过单因素实验和响应面实验优化酶解工艺条件,采用高效液相色谱蒸发光散射检测器测定1,3-DAG含量。最终筛选出脂肪酶催化水解TAG的最佳工艺条件为:酶添加量3850 u/g,水添加量32%,酶解温度70.5℃,反应时间为9.1 h,此条件下制备的1,3-DAG含量为34.36%。(2)采用分子蒸馏法分离纯化酶解产物中的1,3-DAG,去除酶解反应中产生的大量游离脂肪酸和甘油单酯。通过单因素实验研究了蒸馏温度、刮板转速和进料速率对分离纯化1,3-DAG的影响,根据单因素实验结果设计正交实验,再次优化分子蒸馏工艺。实验结果发现,蒸馏温度对分离纯化1,3-DAG的影响最大,其次是刮板转速,进料速率的影响最小,但三个因素对分离纯化的结果都具有显著性。最终确定分子蒸馏工艺的最佳条件为蒸馏温度150℃、刮板转速300 r/min、进料速率3 m L/min,得到的1,3-DAG含量可达41.24%。(3)将18只肥胖症小鼠(ob/ob鼠)随机分为三组:40%1,3-DAG组、80%1,3-DAG组及普通对照组(脂肪酸谱与1,3-DAG相同的TAG组),通过31周的饮食干预研究长期摄入1,3-DAG对ob/ob鼠的影响,实验结果表明1,3-DAG对减少脂肪蓄积、减缓体重增长、降低血脂等具有积极作用。分析三组小鼠的摄食量和体重,发现1,3-DAG组小鼠摄食量高于调和油组,但其体重低于调和油组,说明1,3-DAG不易转化成脂肪在体内蓄积,能够减缓体重的增长;小鼠的血液指标表明,长期的1,3-DAG饮食干预可以改善血脂水平;观察三组小鼠的脂肪组织病理切片,发现1,3-DAG组小鼠脂肪组织细胞数量多、排列紧密,且脂滴粒径小,更接近正常小鼠的脂肪组织。此外,还对小鼠肠道微生物进行了研究,发现饮食干预对肠道微生物整体多样性影响不大,但1,3-DAG组厚壁菌门水平降低。
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