寡孢节丛孢丝氨酸蛋白酶转录调节的研究

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寡孢节丛孢(A.oligospora)是一种研究较为广泛的捕食线虫真菌。本文利用基因芯片,研究了寡孢节丛孢经过线虫及其体壁的诱导后,丝氨酸蛋白酶的表达变化。我们发现了两个显著被诱导升高的体壁降解丝氨酸蛋白酶基因,P186和P12。本研究通过分子生物学的手段成功对P186基因进行了敲除,对敲除前后菌株的生测实验,表明体壁降解丝氨酸蛋白酶基因P186在杀线虫尤其是线虫体壁降解的过程中起到重要作用。同时本文还通过基因芯片技术研究了氮源,碳源,逆境,pH值等对丝氨酸蛋白酶基因表达的影响。   论文主要的创新和研究结果如下:   1.基因芯片分析:通过线虫的诱导,利用基因芯片分析,确定了两种重要的体壁降解丝氨酸蛋白酶基因,并通过分子生物学手段证明了其中一个基因是寡孢节丛孢侵染线虫的一个极为关键的毒力因子基因。   2.寡孢节丛孢体壁降解丝氨酸基因的敲除:本研究利用基因同源重组的原理,对寡孢节丛孢体壁降解丝氨酸蛋白酶极为关键毒力基因进行了敲除,结果表明此基因在对线虫体壁降解的过程中起到极为关键的作用。   3.线虫生测:对敲除菌株的前后实验表明体壁降解丝氨酸蛋白酶基因P186在杀线虫和线虫体壁降解的过程中起着重要的作用。   4.寡孢节丛孢丝氨酸蛋白酶启动子序列的分析:本文利用相关软件对寡孢节丛孢中四个家族24个丝氨酸蛋白酶基因的启动子序列进行了分析,找出其中的氮源调节因子,碳源调节因子,pH值调节因子,逆境调节因子,并进行了初步的分析探讨。   5.敲除菌株和野生菌株对线虫体壁降解的电镜实验:本文分12h,24h,36h,72h,分别同时对敲除菌株和野生菌株在线虫体壁降解的过程中做了电镜实验,实验结果表明:敲除菌株相对野生菌株对线虫体壁降解的程度大大降低,降解时间延后。
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