贵州珍珠半夏的离体培养及遗传稳定性的分子检测

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本文以贵州珍贵半夏品种—珍珠半夏为材料,对其离体快繁、适宜于遗传改良的再生体系、愈伤组织培养,以及离体材料的体细胞遗传变异等方面进行了探讨,以期为半夏试管苗的大规模工厂化生产,种质资源的离体保存及遗传转化等提供技术平台。取得以下结果:1建立并优化了珍珠半夏离体快繁体系采用珍珠半夏球茎为外植体,接种在MS+KT(1.0mg/L)+NAA(0.2-0.4mg/L)+蔗糖(3.0%)+琼脂(0.7%)培养基中,可在30d内完成芽的萌发、增殖以及诱导生根等离体快繁的全过程。炼苗约15d后即可定植于大田。2建立并优化了叶柄和叶片的离体培养体系外植体类型、年龄,培养基中生长调节物质(PGR)种类及含量等因子对珍珠半夏再生有很大影响。叶柄接种于MS+BA(0.5 mg/L)+IBA(0.2mg/L)+蔗糖(3.0%)+琼脂(0.7%)的培养基中,获得了较高的不定芽再生频率;暗培养和AgNO3对其不定芽再生率影响不大。珍珠半夏叶片再生的最适培养基为MS+TDZ(0.2mg/L)+IBA(0.2mg/L)+蔗糖(3.0%)+琼脂(0.7%)。3愈伤组织培养外植体类型、基本培养基、生长素种类及浓度对珍珠半夏愈伤组织的诱导有一定影响。以球茎接种在MS+BA(1.0mg/L)+2,4-D(2.0mg/L)+蔗糖(3.0%)+琼脂(0.7%)培养基上,出愈率最高,且可以有效的防止褐化,愈伤组织质量较好,可用于长期继代培养。TDZ对愈伤组织的再分化效果优于BA、KT及ZT,在MS+TDZ(0.2 mg/L)+IBA(0.5mg/L)+蔗糖(3.0%)+琼脂(0.7%)培养基中,分化的不定芽生长状况良好,且能正常生根。4组培材料遗传稳定性的分子检测采用96个随机引物产生的RAPD标记,对田间材料、组培材料第5代、10代和15代的珍珠半夏试管苗DNA进行检测,没有发现变异;采用78个随机引物对珍珠半夏继代第15代内20个株系的DNA进行检测,也未检测到变异。因此在所用引物检测范围内,珍珠半夏试管苗在15代以内DNA分子上没有发现变异。
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