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犬瘟热(Canine Distemper, CD)是由犬瘟热病毒(CDV)引发的一种急性、高度接触性致死性传染病。可感染犬科、鼬科、浣熊科、大熊猫科、猫科(猫除外)等多种动物,对我国养犬业和毛皮动物养殖业造成较大的经济损失。为此建立一种快速分离犬瘟热病毒的可靠方法尤为重要,以此对我国毛皮动物的犬瘟热病毒进行分离与生物学特性分析,为研制致弱毒株打下了基础。第一部分,从取皮期健康乌苏里貉肺脏中收集巨噬细胞,ELISA实验筛选阳性样本,用Vero细胞分离培养,蚀斑克隆纯化病毒,获得一株疑似犬瘟热病毒。血清学实验、RT-PCR和F基因测序分析,证明该毒株确为犬瘟热病毒,命名为CDV/R-20/12。第二部分,应用淋巴细胞分离液获得健康的乌苏里貉淋巴细胞,将犬瘟热毒株CDV/R-20/12在淋巴细胞中培养,培养5代后仍可感染Vero细胞。由此决定尝试使用淋巴细胞进行野毒株的分离研究,将在临床上获得的毛皮动物(乌苏里貉、狐狸、水貂)首先以RT-PCR鉴定和诊断,筛选出10只CDV阳性病料,然后在获得的淋巴细胞中分离培养犬瘟热病毒。考虑到很多发病的毛皮动物有紧急接种的可能性,采用ARMS-PCR区分是疫苗毒株和野毒株,进行5代培养,分离出5株野毒株。第三部分,从健康的乌苏里貉肺脏分离到的毒株CDV/R-20/12进行生物学特性验证分析。静注、皮下、滴鼻、口服、点眼、肌注等方式接种毒株CDV/R-20/12是安全的,并且不能感染同居的未接种动物。也证明了,毒株CDV/R-20/12在动物体内具有遗传的稳定性,并且能够刺激机体产生的中和抗体效价水平较高,结合ARMS-PCR (MuLtiplex Amplification Refractory Mutation System Polymerase Chain Reaction)初步证明了毒株CDV/R-20/12是CDV弱毒株。第四部分,本研究将筛选出10个CDV阳性样本的F基因进行扩增,并分别将其克隆到pMD18-T Vector,进行序列测定。F基因序列同源性分析：测得CDV F基因序列与Genbank上已报道的CDV毒株相比较。10个病毒株F基因序列同源性均达到97.2%以上,其中所测得毒株CDV-LNHC1和CDV-LNHC2同源性高达99.7%,氨基酸同源性为99.4%。测得序列与GenBank上的国内外CDV F基因序列同源性在90.6%-99.3%。与Thl2的同源率最高,在97.7%-99.2%之间；与毒株Shuskiy同源率最低,约为88.6%-90.2%。总体,10个野毒株与亚洲分离的毒株亲缘关系较近,与欧美等国的强弱毒株亲缘关系都较远。鉴于国内的多数疫苗仍使用欧美等毒株,本实验所测毒株的F基因和氨基酸分析与之差异较大,可见分离毒株具有一定的研究意义,可以作为今后的致弱毒株或生物学研究。