【摘 要】
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黄花苜蓿在抗干旱、抗寒冷、耐盐等方面的优良抗逆性,使其成为培育优良品种的重要种质资源和基因库。NAC转录因子广泛参与了植物的各项生理活动,在植物适应逆境胁迫中发挥重要的作用。本研究以转录组数据为基础,克隆获得了1个序列全长为756 bp的野生黄花苜蓿NAC转录因子基因Mf NAC63,其编码251个氨基酸,分子量(Mw)为29.07 k Da。生物信息学分析发现其编码蛋白在1-75位氨基酸处有NA
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黄花苜蓿在抗干旱、抗寒冷、耐盐等方面的优良抗逆性,使其成为培育优良品种的重要种质资源和基因库。NAC转录因子广泛参与了植物的各项生理活动,在植物适应逆境胁迫中发挥重要的作用。本研究以转录组数据为基础,克隆获得了1个序列全长为756 bp的野生黄花苜蓿NAC转录因子基因Mf NAC63,其编码251个氨基酸,分子量(Mw)为29.07 k Da。生物信息学分析发现其编码蛋白在1-75位氨基酸处有NAM结构域,属于NAC转录因子家族成员,且NAM结构域具有A、B、C、D和E五个亚结构域,并在亚结构域D含有核定位信号。经预测Mf NAC63无跨膜结构域和信号肽,有65.2%的概率定位在细胞核内。以p CAMBIA1300(35S-s GFP)为骨架,构建瞬时表达载体p CAMBIA1300(35S-Mf NAC63-s GFP),注射烟草下表皮细胞后,利用激光显微镜进行观察,发现Mf NAC63定位在细胞核内。同时,验证了Mf NAC63在酵母中具有转录激活功能,且功能域位于蛋白的C端。Mf NAC63在野生黄花苜蓿的根、茎和叶中均有表达,且在叶中的表达量最高,同时其表达受盐或干旱胁迫调节,表明Mf NAC63可能参与了调控野生黄花苜蓿应答胁迫的过程。以载体p PZP221(35S-NOS)为骨架,构建超表达载体p PZP221(35S-Mf NAC63-NOS),转化紫花苜蓿和拟南芥,获得了转化拟南芥T1代植株,为进一步探究Mf NAC63的功能提供实验材料。
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