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本论文以灵芝子实体作为材料,对赤芝子实体水溶性多糖的提取、含量测定、分级沉淀、纯化、结构鉴定等方面进行了初步的研究。结果如下:
一.灵芝子实体多糖提取工艺
1、热水提取法:采用热水煎煮从灵芝子实体中提取多糖,通过正交试验研究了温度、时间、料液比对灵芝子实体多糖提取率的影响:从而确定了提取灵芝多糖的最佳工艺参数:温度100-110℃,时间2h,料液比1∶10。
2、稀NaOH溶液提取法:采用稀碱溶液从灵芝子实体中提取多糖,通过正交试验研究了pH,温度、时间、料液比对灵芝子实体多糖提取率的影响:从而确定了稀碱溶液提取灵芝多糖的最佳工艺参数:温度50℃,时间1h,稀碱浓度0.2mol/L,料液比1∶10。
3、纤维素酶提取法:采用纤维素酶从灵芝子实体中提取多糖,通过正交试验研究了酶解温度、酶解时间、酶量及料液比对灵芝子实体多糖提取率的影响:从而纤维素酶液提取灵芝多糖的最佳工艺参数:温度55℃,酶解时间2h,酶量2.5%(相对于底物),pH7.0。
4、超声波法和超声波纤维素法:采用单因子分析和正交实验,以灵芝提取物中多糖提取率为指标,分别对超声波法和超声波协同纤维素酶法中影响多糖提取效果的主要因素进行研究。结果表明,超声波酶法中各因素对灵芝多糖提取率的影响程度依次为酶解温度、pH值、酶解时间、酶量。最佳提取条件是酶解温度50℃、pH值6.0、酶解时间20min、酶量2.5%(%对底物)。该方法与超声波法相比多糖提取率稍低,但提取物中多糖含量相对高出20%以上;此外,该方法还能缩短提取周期,是一种值得借鉴的提取灵芝多糖方法。
二.灵芝多糖的分离纯化及理化性质
1、所提多糖经脱脂、脱蛋白、真空浓缩、冷冻干燥后,采用苯酚-硫酸法测定其多糖含量。
2、66%、75%乙醇沉淀多糖通过粗多糖的乙醇分级沉淀获得,经过DEAE-SephadexA-25柱层析和G-100葡聚糖凝胶层析法分离,以蒸馏水进行洗脱,分别得到A,B两个组分,命名为灵芝多糖GLP1-1,GLP2-2。
3、66%、75%乙醇浓度沉淀多糖的纯度鉴定试验
采用常压G-100葡聚糖凝胶层析法进行了多糖的纯度鉴定,GLP1-1和GLP2-2均表明为单一多糖组分,可用于结构鉴定。
4、多糖结构分析鉴定
用酸水解法和高效液相法相结合,对赤芝多糖的单糖组成进行了分析,并用紫外光谱、红外光谱进行了多糖结构鉴定,试验结果表明:GLP1-1组成单糖有:D-半乳糖、D-鼠李糖、D-木糖、D-葡萄糖四种,其中D-葡萄糖的含量最高约为40.26%,D-鼠李糖次之为22.03%、D-半乳糖为18.45%,D-木糖为12.23%,说明该多糖不是葡聚糖而是杂多糖。紫外光谱证明无蛋白质和核酸的存在。红外光谱分析结果表明:该多糖是以β-型糖苷键相连接的杂多糖。