论文部分内容阅读
目的:研究趋化因子受体CCR4在结直肠癌侵袭转移过程中的作用及机制。方法:检测CCR4在结直肠癌组织及正常组织中的表达,并分析其表达与临床病理特征的关系。划痕实验、Transwell及动物实验评价CCR4对大肠细胞迁移、侵袭转移的影响。肿瘤转移PCR芯片探索CCR4发挥作用的下游信号通路。通过RNAi技术、特异抑制剂进一步确定CCR4调控肠癌细胞侵袭转移的分子机制。不同浓度TNF-α孵育肿瘤细胞后检测CCR4及下游分子表达的变化。通过染色质免疫共沉淀(CHIP)、双荧光素酶基因报告检测NF-κB结合CCR4启动子区域的位点。结果:RT-PCR和western blot结果显示CCR4在肿瘤组织中的表达明显高于正常组织。CCR4表达与肿瘤淋巴结转移密切相关。CCR4表达阳性的患者的总生存率、无病生存率均显著劣于CCR4阴性的患者。划痕实验、Transwell及动物实验显示过表达CCR4的肠癌细胞侵袭迁移能力明显增强,下调CCR4后的侵袭迁移能力显著减弱。肿瘤转移PCR芯片结果表明,MMP13是细胞过表达CCR4后增加最显著的分子。Si-MMP13和抑制剂CL82198处理后,肠癌细胞的侵袭能力显著下降。IHC结果显示MMP13在肿瘤组织表达显著高于正常组织,且MMP13与CCR4的表达呈线性正相关。免疫印迹结果显示,ERK及Akt信号通路均受CCR4调控。分别用相应的抑制剂处理后,发现MMP13主要受ERK通路及下游的NF-κB调控。细胞因子TNF-α可通过NF-κB上调CCR4表达。CHIP、双荧光素酶报告实验进一步确定了转录因子NF-κB结合CCR4启动子区域的位点结论:趋化因子受体CCR4在结直肠癌肿瘤组织中的表达高于正常组织。CCR4表达阳性的患者的总生存率、无病生存率均显著劣于CCR4阴性的患者。体内外实验证明CCR4能够通过激活ERK/NF-κB/MMP13通路促进结直肠癌细胞的侵袭转移。CCR4受免疫微环境中的TNF-α调控。