【摘 要】
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近年来农产品质量安全问题越发受到各国政府与消费者关注。农药残留是农产品质量安全所要保障的重要因素之一,其逐渐成为社会重要的热点。为规范农药的合理使用,越来越多的国家制定了相应的农药残留标准以及相应法规。由于农药含量低,为要达到微量农药定性分析和定量分析的目的,则必须要建立高效、准确、快速的农药残留检测方法,以保护生态环境和消费者的健康。本研究用荧光量子点标记抗体制备量子点抗体探针,并经由间接竞争反
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近年来农产品质量安全问题越发受到各国政府与消费者关注。农药残留是农产品质量安全所要保障的重要因素之一,其逐渐成为社会重要的热点。为规范农药的合理使用,越来越多的国家制定了相应的农药残留标准以及相应法规。由于农药含量低,为要达到微量农药定性分析和定量分析的目的,则必须要建立高效、准确、快速的农药残留检测方法,以保护生态环境和消费者的健康。本研究用荧光量子点标记抗体制备量子点抗体探针,并经由间接竞争反应建立基于荧光量子点的三唑磷农药免疫分析方法。而后在单残留的基础上再建立对于对硫磷、毒死蜱与三唑磷多种农药残留物检测的荧光免疫分析方法。主要内容如下:采用在表面附有羧基,粒径大小均一、激发波长宽荧光量子点。将农药单克隆抗体和荧光量子点偶联,对标记过程的偶联剂浓度,反应时间,反应温度,等条件进行优化,得到标记荧光量子点的抗体荧光探针。建立了基于荧光量子点的三唑磷农药荧光免疫分析方法,并对方法的分析条件如探针与半抗原的工作浓度、工作条件温度等进行了优化。该方法在0.01-25 μg L-1范围内具有良好的直线关系,检出限(IC10)为5 ng L-1。采用方法对水,梨,黄瓜,水稻和苹果基质进行添加和回收,平均回收率为85.0%~110.3%,相对标准偏差(RSD)为9.4%~17.4%,采用液相色谱质谱串联(LC-MS/MS)的分析法对该方法进行了比较和验证。结果表明,该方法准确度高,灵敏度高,结果可靠,可用于在实际样品中三唑磷农药残留的检测。在三唑磷农药分析方法基础上,建立了基于荧光量子点的三唑磷、对硫磷和毒死蜱农药多残留荧光免疫分析方法。选定了发射波长在520 nm,570 nm,630 nm的荧光量子点标记了抗体,并且将对硫磷抗体量子点探针与毒死蜱量子点抗体探针及其对应的包被半抗原工作浓度进一步优化。结果表明,三种探针和三种包被半抗原之间的特异性良好。三唑磷,对硫磷和毒死蜱分别在0.01-25 μg L-1,0.01-100 μg L-1,0.01-100 μg L-1的范围内线性关系良好,检出限为0.55 ng L-1,1.43 ng L-1和1.89 ng L-1。然后其添加回收试验适用水,大米,梨、苹果还有黄瓜作为基质,其结果与LC-MS/MS的方法互相比较确认。则本方法平均回收率为75.7-113.8%。其相对标准偏差(RSD)为6.3-18.2%,接近LC-MS/MS分析方法的结果,这表明该方法准确可靠。在实际样品中对于对硫磷、三唑磷和毒死蜱的多残留检测分析要求可以满足。也可以为其它农药多残留检测的分析提供参考。
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