回归热螺旋体实验性感染树鼩的初步探索

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[目 的]回归热(relapsing fever)是由回归热螺旋体引起的急性传染病,其临床特点为周期性的高热且时常出现反复发作,并伴随肌肉酸痛、肝脾肿大等症状,重症患者有黄疸和出血倾向,并涉及神经症状,类似于感冒,诊断时很容易与病毒性感冒混淆,导致延误治疗而造成严重的后果,因此构建一个回归热螺旋体的动物感染模型可让我们对疾病的发生发展以及致病机制更加了解。目前已构建出回归热螺旋体小鼠动物模型,而树鼩(Tupaia Belangeris,tree shrew)作为一种新型实验动物,近些年研究人员对树鼩进化、分类和遗传学的研究更加深入,发现树鼩与人及其他灵长类动物具有相似的生物学特征,也因此一直被广泛地用于生物医学动物模型研究。于是我们尝试利用回归热螺旋体来感染树鼩,探讨回归热螺旋体实验性感染树鼩后,其病原体在树鼩体内的繁殖情况,以及螺旋体感染树鼩后引起的免疫反应、临床症状和病理变化等特征,对回归热螺旋体树鼩模型进行初步探索。[方 法]腹腔注射病原体为较快的吸收途径,且操作容易。选取1~2岁F1代健康成年树鼩,将回归热螺旋体的一个种类赫姆氏疏螺旋体(Borreliahermsii),经腹腔注射感染树鼩,在感染前取树鼩抗凝血作为对照,注射之后每日进行尾血抗凝采集,通过暗视野显微镜计数外周血中螺旋体的数目,同时每日记录树鼩的体温变化,以及观察树鼩所出现的症状;实验后期对树鼩进行麻醉解剖,取其脏器进行HE染色组织病理分析以及通过免疫组织化学(IHC)实验定位树鼩体内螺旋体,并检测树鼩的肝功能和脾脏淋巴细胞变化等。[结 果]用回归热螺旋体Borrelia hermsii实验性感染树鼩后,实验结果表明:1)通过对树鼩菌血症的监测,发现回归热螺旋体在树鼩体内能有效地增殖,且呈周期性变化。树鼩在感染螺旋体后第7天左右会出现第一个菌血症高峰,之后开始下降,第12~14天左右又形成一个峰,最终形成一个“回归”状增殖曲线;2)树鼩在感染过程中体温无明显变化,与未感染树鼩一样,一般维持在40℃~42℃之间,但是树鼩在死亡之前体温通常会骤降2℃~10℃,之后24h内就会发生死亡;3)观察树鼩出现的症状发现,树鼩感染螺旋体会出现双后肢无力、尾无力等神经症状;4)对树鼩解剖发现,螺旋体感染引起了树鼩肝脏和脾脏的明显肿大,尤其是脾脏,大小约为正常树鼩的2倍;5)组织病理学分析表明,螺旋体感染造成树鼩肝脏和脾脏内发生严重的炎性浸润,组织间充斥着大量炎性细胞;6)检测树鼩的肝功能,ALT以及AST的结果提示,树鼩肝脏细胞可能发生了大量坏死;7)流式检测发现,树鼩感染螺旋体后脾脏内淋巴细胞数量减少,尤其是B淋巴细胞。[结 论]回归热螺旋体能有效感染树鼩,形成“回归状”菌血症,引起树鼩神经症状,并造成树鼩肝脾脏器内大量炎性浸润,发生肝脏细胞坏死以及脾脏内淋巴细胞损耗。因此,本研究提示树鼩可作为研究回归热螺旋体感染和致病机制的动物模型。
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