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肝纤维化是指肝细胞发生坏死及炎症刺激时,肝脏中胶原蛋白等细胞外基质增生与降解失去平衡,导致肝脏内纤维结缔组织异常沉积的病理过程。近年来随着肝纤维化发病机制研究有了长足进展,肝纤维化被认为具有可逆转性,因此可对肝纤维化发生学的信号传导通路、细胞因子基因表达、HSC激活与凋亡过程等环节进行抗肝纤维化治疗。TGF-β1是一种多功能的肽类生长因子,与调节生长、分化、细胞外基质沉积和免疫反应有着广泛的潜在效应,能改变细胞外基质的分解与合成正常平衡,增加基质合成并相应的减少总的ECM蛋白水解活性,结果导致网状纤维的形成。目前被认为是肝纤维化形成的关键因子。肝纤维化的一系列改变涉及到多种信号通路,直接的或者间接的,包括其它血纤维蛋白溶酶原的上调。而TGF-β1和Smads分子均参与肝纤维化的发生、发展,TGF-β1主要依赖于其下游的受体和一族高度保守的胞内信号Smad蛋白家族介导其信号传递,发挥生物学效应。苦参素(oxymatrine,OM),又名氧化苦参碱,是苦参碱经氧化合成、纯化、提取而得到的有效单体,是苦参碱的N-氧化物,氧化苦参碱因具有特殊的氧结构,从而使分子极性大增,较苦参碱具有独特的作用机理和疗效。本研究通过观察其受体TβRI和Smads蛋白在肝纤维化组织中的动态表达,初步探讨苦参素对Smads蛋白及其介导的信号转导通路在肝纤维化发生、发展过程中的作用。研究内容主要包括以下三个部分:1.苦参素(OM)对四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠的作用动物实验结果显示,OM对CC14诱导的大鼠肝纤维化具有良好的保护作用。模型组ALT、AST、HA、LN、CIV、PCIII等纤维化血清学标志物水平较正常组明显升高,给予OM治疗后可使其显著降低。肝纤维化的另一个重要指标肝组织Hyp含量的检测结果显示,OM可显著降低模型组的Hyp值。组织病理学结果表明OM可明显的抑制肝纤维化程度,改善肝组织结构,减少胶原沉积。实验中还观察了OM对模型大鼠血清中I型胶原和TGF-β1含量的影响。ELISA法检测结果显示OM治疗后模型大鼠血清中I型胶原和TGF-β1含量明显降低。RT-PCR检测TGF -β1、smad2、Smad3、smad7的mRNA表达显示OM可以抑制TGF -β1、smad2、Smad3mRNA的表达,同时升高smad7mRNA的表达。2.苦参素在体外实验中对TGF -β1刺激的HSC-T6增殖的抑制作用建立体外TGF-β1诱导的HSC-T6模型,OM在0.01,0.1,1,10,10mg·L-1浓度可抑制HSC-T6增殖,抑制率与OM浓度成正比,提示OM有抑制HSC增殖的作用。3.苦参素对HSC-T6活化过程中TGF-β/smads信号通路的影响提取转化生长因子-β1刺激的HSC-T6细胞总蛋白。Western blot检测TβRI , smad2 , Smad3, Smad7蛋白的表达变化。结果表明,表达TβRI , smad2 , Smad3蛋白明显增加,但抑制型Smad蛋白——Smad7则有所降低。与此同时,给予OM治疗后TβRI , smad2 , Smad3蛋白水平明显降低,同时也增加了水平Smad7的蛋白质的表达。提示OM可能通过抑制TGF–β/smads通路发挥其对HSC-T6的作用。以上结果均表明,OM可以有效改善肝功能,减少纤维化大鼠的胶原沉积,缓解纤维化进程,对TGF–β/smads信号通路的抑制是其可能的作用机制之一。