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流感病毒属于正粘病毒科（Orthomyxoviridae），根据其内部核蛋白（NP）和基质蛋白（M）抗原性的不同，可分为A、B、C三型。A型流感病毒抗原性易发生变异，多次引起世界性大流行，现有抗流感病毒药物都存有不同程度的副作用及病毒耐药性。流感病毒RNA聚合酶行使很重要的并且高度保守的复制、转录功能，以及其亚基的原子结构、准原子结构都已明确，因此RNA聚合酶复合物已成为流感病毒药物的一个重要靶标。目的：本研究旨在建立基于RNA聚合酶亚基间相互作用的抗流感病毒药物筛选系统，并利用该系统进行抗流感病毒中药的初步鉴定，为靶向性抗流感病毒药物的研究奠定基础。方法：1.利用高保真聚合酶对流感病毒（A/PR/8/34）RNA全长基因进行PCR扩增，并克隆到T载体；2.设计流感病毒（A/PR/8/34）RNA聚合酶亚基PB1、PA特异性引物，以RNA聚合酶亚基PB1、PA的T克隆载体为模板进行PCR扩增获得PB1、PA全长基因；3.将PB1、PA基因分别克隆至载体pGBKT7、pGADT7，并分别转化至大肠杆菌DH5α，接种培养，挑取单菌落进行PCR鉴定，送样测序；4.将上述PCR鉴定阳性并测序正确的重组质粒PB1-pGBKT7、PA-pGADT7共转化到AH109酵母感受态细胞，构建流感病毒PB1-PA酵母双杂交体系，选择性培养基接种培养，提取阳性酵母克隆的质粒DNA进行PCR鉴定；5.阳性酵母克隆选择性培养基培养，利用Glass-beads法提取酵母蛋白，进行Western-blot验证；6.利用特异性引物进行PCR扩增获得PB1、PA基因，并分别克隆至载体pAcGFP1、pProLabel，酶切鉴定并送样测序；7.利用脂质体Lipofetamine2000将重组质粒PB1-pAcGFP1、PA-pProLabel共转染至人胚肾GP2-293细胞，进行PCR鉴定、双酶切鉴定、Western-blot验证、免疫共沉淀（Co-IP）验证；8.选取具有潜在抗流感病毒的中药，利用上述构建的PB1-PA酵母双杂交载体进行抗流感病毒中药的初步鉴定。结果：1.重组质粒PB1-pGBKT7、PA-pGADT7分别转化大肠杆菌DH5α的PCR结果显示PB1、PA基因阳性，酶切鉴定、测序结果说明重组质粒PB1-pGBKT7、PA-pGADT7构建成功；2.选择性培养基SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-Gal中长出蓝色菌落，PB1-PA-AH109阳性酵母转化子的Western-blot结果显示PA-HA融合蛋白阳性，PB1-Myc融合蛋白阴性；3.重组质粒PB1-pAcGFP1、PA-pProLabel分别转化大肠杆菌DH5α的PCR结果显示PB1、PA基因阳性，酶切鉴定、测序结果说明重组质粒PB1-pAcGFP1、PA-pProLabel构建成功；4.重组质粒PB1-pAcGFP1、PA-pProLabel共转染GP2-293细胞，荧光显微镜下观察到绿色荧光，Western-blot结果显示目的融合蛋白PB1-GFP表达阳性；5.免疫共沉淀结果显示在t=100min，阴性对照RLU值10左右，实验样品PB1-PA的RLU值为1000左右；6.利用酵母双杂交体系进行靶向性抗流感病毒作用的中药的初步鉴定，结果为具有潜在靶向性抗流感病毒作用的中药使酵母转化子的OD600下降0.2-0.3。结论：1.成功构建流感病毒（A/PR/8/34）RNA聚合酶亚基PB1、PA的T克隆载体；2.流感病毒聚合酶PB1、 PA亚基酵母双杂交体系的载体构建成功（PB1-pGBKT7、PA-pGADT7）；3.流感病毒聚合酶PB1-PA-AH109酵母双杂交体系构建成功；4.流感病毒聚合酶PB1、PA亚基的重组哺乳动物表达载体PB1-pAcGFP1、PA-pProLabel构建成功；5.重组哺乳动物表达载体PB1-pAcGFP1、PA-pProLabel成功共转染人胚肾GP2-293细胞；6.流感病毒聚合酶PB1、PA亚基在哺乳动物细胞中仍具有相互作用；7.筛选得到鱼腥草、射干、金银花、羌活、广藿香、荆芥六种中药可能具有靶向性抗流感病毒的作用。