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背景巨噬细胞属于免疫细胞的一种,是机体固有免疫的重要组成部分。在代谢类疾病中起着重要的调控作用。其特征是促炎巨噬细胞和其他免疫细胞的浸润和激活,这些细胞产生的大量促炎因子在炎症中发挥着重要的作用。当LPS进入细胞与细胞膜上的受体作用后会引发细胞内的信号转导,使得炎症因子的基因转录增强,导致IL-6、IL-1β等炎症因子大量释放。S100蛋白是一类庞大的家族蛋白,而S100A10是其中的一种蛋白,又被称为P11。之前的一些研究主要是S100A10在早幼粒细胞白血病、肝癌、乳腺癌等肿瘤疾病的进程中所起的作用,当然在一些炎症性疾病中的研究也不少。那么S100A10敲除对巨噬细胞有什么影响呢?我们仍然不是很清楚。因此我们想通过研究S100A10敲除对巨噬细胞功能的影响,进而为巨噬细胞相关代谢疾病的预防和治疗提供新的见解。目的通过研究S100A10-KO的巨噬细胞分泌炎症因子、极化、代谢等各种指标的改变,来探究S100A10对巨噬细胞功能的影响及机制。方法1.检测S100A10敲除对巨噬细胞分泌炎症因子的影响。（1）将WT RAW264.7细胞与S100A10-KO RAW264.7细胞分为2组,一组正常培养,另外一组LPS 100ng/ml 6小时,之后提细胞RNA,RT-PCR检测IL-6、IL-1β、MCP-1相关炎症因子的表达水平。（2）用巯基乙酸盐对小鼠进行腹腔注射诱导小鼠腹腔巨噬细胞（PMs）的募集,三天后收取PMs。将WT PMs与S100A10-KO PMs分两组培养,一组正常培养,另外一组LPS 100ng/ml 6小时,之后提细胞RNA,RT-PCR检测IL-6、IL-1β、MCP-1相关炎症因子的表达水平。（3）小鼠骨髓巨噬细胞的提取,取小鼠两条后肢,剥腿并将骨髓冲出,用L929上清将其诱导七天至成熟状态。将WT小鼠骨髓巨噬细胞与S100A10-KO小鼠骨髓巨噬细胞分两组培养,一组正常培养,另外一组LPS 100ng/ml 6小时,之后提细胞RNA,RT-PCR检测IL-6、IL-1β、MCP-1相关炎症因子的表达水平。（4）用ELISA试剂盒检测RAW264.7、PMs、BMDMs上清中IL-6的炎症因子含量。（5）向细胞中转染NF-κB质粒,通过luciferase实验检测S100A10是否对NF-κB通路有调控作用。2.检测S100A10敲除对巨噬细胞糖代谢的影响。取小鼠骨髓巨噬细胞和RAW264.7细胞做seahorse实验来检测巨噬细胞胞外酸化率（ECAR）。3.检测S100A10敲除对巨噬细胞极化的影响。（1）M1型与M2型巨噬细胞的诱导:取BMDMs诱导7天后,用LPS、IFN-γ将其诱导为M1型,用IL-4将其诱导为M2型,诱导时间为24h。流式检测M1、M2巨噬细胞的比例。（2）RT-PCR检测极化后的M1型巨噬细胞分泌的IL-6、IL-1β、MCP-1等相关炎症因子的表达水平。（3）Western blot检测M1型巨噬细胞标志物iNOS的蛋白表达。4.检测S100A10敲除对巨噬细胞功能的影响。（1）用划痕实验和transwell来检测S100A10敲除是否对巨噬细胞的迁移与侵袭有影响。（2）用CCK8试剂盒检测S100A10是否对巨噬细胞的增殖有影响。5.探究S100A10对与巨噬细胞迁移相关蛋白的影响。用RT-PCR来检测巨噬细胞的MCP-1、MYH9、CCR2、MMP9的表达,Western blot检测MMP9、MYH9的表达。6.检测巨噬细胞CCR2的表达。将WT RAW264.7细胞与S100A10-KO RAW264.7细胞分为2组,一组正常培养,另外一组LPS 100ng/ml 12小时,流式检测细胞上CCR2的表达。结果1.RT-PCR检测结果是S100A10基因敲除之后RAW264.7、PMs、BMDMs分泌的炎症因子IL-6、IL-1β、MCP-1降低。ELISA检测S100A10敲除后细胞上清中IL-6降低。单荧光素酶报告基因实验表明巨噬细胞中S100A10敲除能够抑制NF-κB通路的激活。2.Seahorse实验结果是S100A10敲除对巨噬细胞糖代谢无影响。3.流式结果为S100A10敲除对巨噬细胞向M1型极化无影响,促进M2型极化。并且基因敲除之后M1型巨噬细胞炎症因子分泌减少。Western blot检测iNOS的表达无差异。4.划痕实验和transwell实验表明S100A10敲除之后巨噬细胞的迁移侵袭能力减弱,CCK8实验表明S100A10敲除之后巨噬细胞的增殖能力减弱。5.RT-PCR和Western blot结果提示S100A10敲除之后MMP9,MYH9的表达降低。提示00A10是通过迁移相关蛋白的表达来发挥迁移的功能。6.流式检测结果为S100A10敲除后巨噬细胞上MCP-1的配体CCR2无差异。结论本研究认为S100A10敲除之后巨噬细胞炎症因子分泌减少,迁移和增殖的能力减弱。S100A10对巨噬细胞的极化与代谢没有影响。