骨髓间充质干细胞移植联合洛伐他汀缓释支架治疗大鼠心肌梗死的实验研究

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目的:制备洛伐他汀-聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)缓释支架,初步评价其作为一种心肌组织工程支架材料的可行性。方法:温度梯度诱导相分离法制备PLGA支架和洛伐他汀-PLGA缓释支架,通过扫描电镜观察支架超微结构,缝合拉力试验检测其横向及纵向力学性能,进行水解试验评价其降解性能。建立大鼠皮下包埋模型,分别于1周、1月取材后进行H&E染色评价其组织相容性。全骨髓法获取骨髓间充质干细胞,将第3代骨髓间充质干细胞以4×106/cm2的浓度种植于支架材料上,通过Hoechst染色和扫描电镜观察骨髓间充质干细胞在支架材料上的生长情况。结果:1、洛伐他汀-PLGA支架扫描电镜下呈取向排列,内部互相贯通,支架孔隙丰富利于细胞生长。2、洛伐他汀-PLGA支架材料力学性能稳定,其纵行缝合强度与PLGA支架相似(4.8±0.4N vs5.0±0.5N,p>0.05)。3、洛伐他汀-PLGA支架从第6周起降解速度加快,至第8周时其质量残余率小于PLGA支架(78.8±0.8%vs81.9±1.6%,P<0.01)。4、洛伐他汀-PLAG支架植入大鼠皮下1周及1月时未见明显炎症反应,支架全层出现大量毛细血管,大鼠自身细胞沿支架材料纵向生长。5、Hoechst染色、扫描电镜显示洛伐他汀-PLGA支架上骨髓间充质干细胞堆叠样生长,铺满支架。结论:1、洛伐他汀-PLGA支架满足心肌组织工程形态学和力学性能要求,并具备降解和药物缓释性能;2、洛伐他汀-PLGA缓释支架具良好的细胞和组织相容性,骨髓间充质干细胞能在支架上良好生长,它可作为心肌组织工程支架材料进行体内安全的移植。目的:研究组织工程洛伐他汀-PLGA缓释支架治疗大鼠慢性心肌梗死的效果及可能机制。方法:通过前降支结扎法建立大鼠的心肌梗死模型。3周后将筛选合格的动物模型随机分为5组:对照组(Con组)仅再次开胸;PLGA支架组(P组),洛伐他汀-PLGA支架组(LP组),组织工程PLGA支架组(TP组),组织工程洛伐他汀-PLGA支架组(TLP组)。手术1,4,8周后,超声心动图和血流动力学评价心室重构和心脏功能,Masson染色检测心肌纤维化情况,免疫组化染色分析梗死区TGF-β1、MMP-2,9、TNF-α的表达和新生毛细血管密度,普通PCR检测骨髓间充质干细胞(BMSCs)存活和免疫荧光法检测其分化情况。结果:与Con组相比,实验终点各组左室射血分数、左室短轴收缩率、左室收缩末期压力、左室压最大升降速率都有所改善(P<0.01),而且TLP组改善程度好于其他实验组(P<0.05)。Masson染色显示TLP组心肌纤维化程度较其他组轻,且免疫组化染色显示TLP组TGF-β1、MMP-2,9、TNF-α的表达较其他组少,但其新生毛细血管密度明显增加(P<0.01)。TP组及TLP组术后检测到雄性大鼠Y染色体存在,免疫荧光染色发现少量细胞向心肌方向分化。结论:组织工程洛伐他汀-PLGA支架能能抑制心肌梗死后心室重构和炎症反应,促进心肌梗死区血管新生,实现BMSCs移植后的存活,因而组织工程洛伐他汀-PLGA支架移植改善了大鼠心肌梗死后心功能。
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