千金降糖方源自孙思邀《备急千金要方》中的黄连丸,由黄连、鲜地黄两味中药组成,黄连为君,鲜地为臣,相须为用,共奏滋阴清热之功效,具有清热解毒,滋阴益精的作用。现代药理研究表明,黄连中的生物碱盐酸小檗碱能改善糖脂代谢,鲜地黄中的环烯醚萜苷梓醇能够显著提高糖尿病小鼠的糖耐量,降低实验性糖尿病小鼠的空腹血糖。临床上主要用于治疗阴虚热盛型消渴病(即现代医学的糖尿病),长期临床验证,效果显著。因此,本课题选用千金降糖方进行研究。具体研究内容及结果如下:1.鲜地黄和黄连药材的质量控制研究2010年版《中国药典》中鲜地黄药材仅有其性状标准,并没有其活性成分的定性鉴别及含量测定方法,无法控制鲜地黄药材的质量。本实验建立薄层色谱法对鲜地黄药材中主要活性成分梓醇进行了定性鉴别,结果斑点分离好,证明所选方法专属性强。测定鲜地黄药材中的含水量,并采用高效液相色谱方法对药材中梓醇进行了含量测定,方法学研究表明该法准确、可靠,操作简便,可用于鲜地黄药材的质量控制。测定结果为:购自河南焦作的三批鲜地黄药材(批号:20101125、20110409、20111115)的含水量分别为 83.90%、84.40%、85.72%,梓醇含量(按干重计)分别为7.23%、7.04%、7.38%;2010年版《中国药典》采用一测多评法对黄连中的生物碱进行含量测定,并且小檗碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀的含量都有下限规定,较之前的质量标准,有了进一步的提高。因此,本实验采用此方法对黄连药材进行质量控制。测定结果:20090704批购于重庆的黄连药材生物碱含量分别为:表小檗碱为1.13%,黄连碱为1.74%,巴马汀为1.71%,小檗碱为5.97%,均高于药典规定的下限。2.千金降糖方提取工艺路线筛选研究根据药材中主要活性成分的理化性质和药理作用,设计了四个提取工艺路线为:古方制备工艺、混合回流工艺、分提工艺1(含低聚糖)、分提工艺2(不含低聚糖)。比较不同提取工艺路线的指标性成分梓醇和盐酸小檗碱的转移率;同时运用多成分色谱技术比较不同提取工艺路线的差异;采用小鼠糖耐量实验,对千金降糖方不同工艺路线进行初步的药效筛选考察。综合分析实验结果,确定了千金降糖方的最佳提取工艺路线:取鲜地黄药材2kg,切成小块,30%乙醇闪式提取,提取液过滤,然后减压浓缩,得到的浓缩液进行醇沉,放置24h,将醇沉上清液部分60℃减压浓缩干燥,粉碎,过筛,得鲜地黄提取物。取黄连50g,加入8倍量70%的乙醇提取三次,每次1.5h,合并提取液,过滤,减压浓缩后干燥,粉碎,过筛,得黄连提取物。最后,取鲜地黄和黄连提取物粉末,根据出膏率计算其生药量,按生药量1:10混合,摇匀即得(分提工艺2);3.千金降糖方提取工艺参数优化研究运用单因素试验考察了黄连热回流提取工艺中不同乙醇体积分数对盐酸小檗碱提取率和出膏率的影响,通过正交试验以盐酸小檗碱提取率和出膏率为评价指标对提取工艺参数进行优化,确定了最佳提取工艺参数为:黄连加12,10,10倍量70%的乙醇回流提取三次,每次1.5h,在优选的工艺条件下盐酸小檗碱的提取率为90.72%,出膏率20.88%;采用星点设计-效应面法以梓醇提取率和出膏率为评价指标对鲜地黄药材的闪式提取工艺参数进行优化,确定最佳提取工艺参数为:鲜地黄加15倍量25%乙醇,提取1次,提取时间80s,在优选的工艺条件下梓醇的提取率为88.32%,出膏率16.43%。同时对工艺四中醇沉工艺进行正交试验优化,确定最佳醇沉条件为:鲜地黄闪式提取浓缩液相对密度1.10,醇沉至80%,醇沉时间12h。