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本实验由“确立CCL4综合因素诱导大鼠肝纤维化模型”“雄芍汤防治肝纤维化作用与TRAIL-FADD/caspase8凋亡通路”及“雄芍汤对大鼠肝细胞凋亡的影响”三部分组成。目的:本实验从温补脾肾的角度分析肝纤维化的防治,通过确立CCL4综合因素诱导大鼠肝纤维化模型进展期及恢复期,观察雄芍汤防治肝纤维化的作用,揭示雄芍汤、肝纤维化、肝细胞及TRAIL-FADD/caspase8细胞凋亡通路之间的内在联系,探讨雄芍汤防治肝纤维化的细胞凋亡通路,为中医药防治肝纤维化研究提供新的思路和方法。方法:实验一30只健康雄性SD大鼠,皮下注射CCl4与花生油的混合液（二者比例为4:6）,每周两次,分别于周二、周五注射,注射剂量为3ml/kg/次（注:第1次皮下注射的CCl4与花生油混合液比例为3:1,注射剂量为5ml/kg）,并给以玉米面+0.5%胆固醇+20%猪油的高脂低蛋白食物2周,玉米面+0.5%胆固醇的高脂低蛋白食物4周,饮料仅用30%酒精。分别于实验的0、4、6、8周末,随机选取6只收集血清及病理学标本,并通过检测肝组织病理学改变、羟脯氨酸（HyP）含量,血清天门冬氨酸转移酶（ALT）、丙胺酰氨基转移酶（AST）、透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、Ⅳ-C型胶原（CIV）和Ⅲ型前胶原（PCⅢ）等指标,确立CCl4综合因素诱导的大鼠肝纤维化模型进展期和恢复期（成模后4周为恢复期）。实验二64只雄性SD大鼠,随机分为六组。正常六:8只,皮下注射无菌花生油,注射时间同CCl4注射时间,自由食用标准饲料和水,与预防组雄芍汤对等灌喂纯净水;模型六:12只,按实验一CCl4综合因素6周造模,与预防组雄芍汤对等灌喂纯净水;预防六:12只,模型六基础上每日给予雄芍汤灌胃（给药剂量为成人临床日剂量7倍,雄芍汤药液8.050g/kg）;正常十:正常六基础上再正常喂养4周,与治疗组雄芍汤对等灌喂纯净水;恢复十:12只,模型六基础上,正常喂养自然恢复4周,与治疗组雄芍汤对等灌喂纯净水;治疗十:12只,模型六基础上,正常喂养同时灌胃雄芍汤4周（灌药同预防六）。6周末采集正常六、模型六、预防六各组大鼠血清及肝脏的标本;10周末采集正常十、恢复十、预防十各大鼠血清及肝脏的标本,采用紫外-乳酸脱氢酶法和紫外-苹果酸脱氢酶法分别检测各组大鼠血清ALT、AST变化;采用放免法检测各组大鼠血清HA、LN、CIV和PCⅢ含量;采用样本水解法检测各组大鼠肝组织HyP含量;采用HE和Masson染色观察各组大鼠肝组织病理形态学改变;采用免疫组化检测各组大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、5-脂氧合酶（5-LO）的表达;采用PCR和（或）Western blot检测各组大鼠肝组织5-LO、α-SMA、基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP1）、基质金属蛋白酶-13（MMP13）、肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）、Fas偶联死亡区域蛋白（FADD）、蛋白水解酶-8（Caspase-8）、B淋巴细胞瘤-2（BCL-2）、Cyt-c（细胞色素C）的mRNA和（或）蛋白表达。实验三大鼠肝细胞（BRL）培养传代,随机分为六组,分别与第二部分正常六、模型六、预防六、正常十、恢复十、治疗十各组血清共培养,采用流式细胞术检测各组大鼠肝细胞凋亡情况。结果:实验一大鼠0、4、6、8周血清ALT、AST、HA、LN、PCⅢ、CIV及肝组织Hyp指标变化:与0周比较,4、6、8周指标均明显增高,差异均有统计学意义（P<0.01）;随着造模时间延长,4、6、8周指标逐级升高,与6周比较,4周指标下降均有统计学差异（P<0.01）,8周指标上升亦均有统计学差异（P<0.05）。大鼠0、4、6、8周肝组织HE染色结果:4周出现广泛微泡性脂肪变性,汇管区纤维结缔组织增生,淋巴细胞浸润,肝组织出现纤维分割;6周出现较多成纤维细胞,纤维结缔组织增生,纤维间隔增多;8周出现典型的假小叶。大鼠0、4、6、8周肝组织Masson染色并Image Proplus肝纤维化分级结果:0周,6只均为0级;4周:1级4只,2级2只;6周:2级和3级各3只;8周,3级1只,4级5只。实验二各组大鼠血清ALT、AST、HA、LN、PCⅢ、CIV及肝组织Hyp指标变化。与正常六比较模型六指标均上升,差异均有统计学意义（P<0.01）;与模型六比较预防六指标均下降,差异均有统计学意义（P<0.01）;与正常十比较恢复十指标均上升,差异均有统计学意义（P<0.01）;与恢复十比较治疗十指标均下降,差异均有统计学意义（P<0.01）。各组大鼠肝组织HE及Masson染色结果。正常六:无肝纤维化表现;模型六:出现肝细胞坏死,肝组织脂肪变性,成纤维细胞、纤维结缔组织、胶原纤维增多,肝小叶破坏等肝纤维化表现;预防六:与模型六比较,肝纤维化表现明显减轻;恢复十:与恢复十比较无明显改善;治疗十:与恢复十比较,肝纤维化表现明显减轻。各组大鼠肝组织5-LO、α-SMA、TIMP-1、MMP13（单做Western Blot）、TRAIL、FADD、Caspase-8、BCL-2（单做PCR）、Cyt-c（单做Western Blot）的Western Blot与PCR检测结果:与正常组比较,模型六及恢复十指标表达均明显增强且差异有统计学意义（P<0.01）;与模型六比较,预防六指标的表达减弱且差异有统计学意义（P<0.01）;与恢复十比较,治疗十指标的表达减弱且差异亦有统计学意义（P<0.05）。实验三与正常六相比,模型六BRL凋亡增强差异有明显统计学意义（P<0.01）;与模型六相比,预防六BRL凋亡减弱差异有明显统计学意义（P<0.01）,恢复十BRL凋亡减弱差异有明显统计学意义（P<0.01）;与正常十比较,恢复十BRL凋亡增强差异有明显统计学意义（P<0.01）;与恢复十比较,治疗十BRL凋亡减弱差异有明显统计学意义（P<0.01）。结论:1雄芍汤具有促进CCL4综合因素诱导的大鼠肝纤维化恢复和减缓CCL4综合因素诱导的大鼠肝纤维化进展的作用。即:雄芍汤具有防治肝纤维化的作用。2雄芍汤防治肝纤维化的机制与以下途径有关:保护HC;抑制HSC活化;增强MMP-13活性;抑制TIMP-1活性;抑制5-LO活性;减少HC凋亡,抑制TRAIL-FADD/caspase8细胞凋亡通路。3雄芍汤含药血清对大鼠肝细胞的凋亡有抑制作用;雄芍汤可能通过抑制TRAIL-FADD/caspase8细胞凋亡通路减少HC的凋亡发挥防治肝纤维化的作用。