【摘 要】
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松萎病又称为松材线虫病,是由松材线虫[Bursaphelenchus xylophilus(Steiner&Buhrer)Nickle]引起的一种破坏性松树病害,是世界上影响针叶林最严重的全球树木病害之一,给世界生态坏境与经济造成巨大破坏。近年来,越来越多的研究证明松材线虫的伴生菌及其关键基因在松材线虫的致病过程中扮演重要的角色。因此,研究松材线虫与其伴生菌的关系以及松材线虫关键致病基因,对于了解
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松萎病又称为松材线虫病,是由松材线虫[Bursaphelenchus xylophilus(Steiner&Buhrer)Nickle]引起的一种破坏性松树病害,是世界上影响针叶林最严重的全球树木病害之一,给世界生态坏境与经济造成巨大破坏。近年来,越来越多的研究证明松材线虫的伴生菌及其关键基因在松材线虫的致病过程中扮演重要的角色。因此,研究松材线虫与其伴生菌的关系以及松材线虫关键致病基因,对于了解松材线虫致病机理具有重要意义。本研究基于宏基因组分析,研究了两种不同来源(Q和F样品)的松材线虫伴生细菌的差异。结果表明,细菌在两个样品中的分布有显著差异。在门水平上,两个样品中占比最高的个菌门均为变形杆菌(Proteobacteria),其在F样品中约占85%,而在Q样品中占65%左右。在科水平上,F样中肠杆菌科(Enterobacteriaceae)和根瘤菌科(Rhizobiaceae)占优势,总相对丰度在55%左右,而Q样中这两个菌系仅占15%左右。此外,伯克氏菌科(Burkholderiaceae)仅在F样本中检出。基于KEGG数据库的PICRUSt分析表明,F样品中松材线虫伴生的细菌具有较强的氨基酸代谢、糖代谢、能量代谢、细胞色素p450药物代谢、膜转运、复制修复和翻译能力。此外,用Bug Base对F和Q样品中的细菌进行了表型分析,结果表明F样品中的细菌具有较强的致病性和抗氧化胁迫能力。利用两种来源的线虫测试了其摄食能力和致病性,结果表明F样品中的松材线虫具有较强的取食能力和致病性,与KEGG和Bug Base分析结果相一致。研究表明,松材线虫的致病性与其伴生菌密切相关,属于变形菌门的肠杆菌科(Enterobacteriaceae)、根瘤菌科(Rhizobiaceae)和伯克霍尔德菌科(Burkholderiaceae),是重要的致病相关菌系,这对于松材线虫的致病性研究具有重要意义。为了深入了解松材线虫伴生菌对松材线虫的影响,本文对无菌松材线虫与伴生单一致病菌荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)的松材线虫转录组进行了分析,并对两种松材线虫的取食能力进行了比较。通过差异表达基因注释发现了受荧光假单胞菌调控的218个下调基因与89个上调基因。一些与致病力、生长发育与神经传递有关的基因表达上调,推测在松材线虫中,这些基因与线虫的致病性有关。KEGG富集分析结果显示,伴生荧光假单胞菌的松材线虫中“糖酵解/糖异生”途径以及与“糖酵解/糖异生”途径有着密切联系的其它能量代谢通路富集了更多的差异表达基因,表明伴生荧光假单胞菌的松材线虫与无菌松材线虫在能量代谢上存在较大差异。为深入了解松材线虫与其伴生细菌的协同致病机理提供了新的理论依据。另外,对松材线虫的一种关键致病基因果胶裂解酶基因BxPel2进行了克隆与重组表达。成功克隆长度为750 bp的松材线虫Bx Pel2,并在大肠杆菌工程菌中进行了诱导表达。通过镍离子亲和层析纯化,得到大小约28 k Da的重组蛋白,与预期大小相吻合。酶活测定表明,所得重组果胶裂解酶的比活为98.832 U/mg。为进一步阐明松材线虫果胶裂解酶的功能及开展以该酶为靶标的松材线虫防控研究奠定了一定基础。
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