猪源乳酸菌的分离鉴定及其益生作用研究

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为了进一步明晰乳酸菌与仔猪健康的关系及其潜在的益生作用,本研究探讨了仔猪断奶前后各肠段中大肠杆菌和乳酸杆菌数量的变化,同时从中分离并鉴定了5株乳酸菌,并对其产乳酸能力、抑菌特性以及在模拟胃肠环境因素条件下的存活进行了研究。整个实验分四部分: 第一部分:哺乳仔猪不同肠段食糜中大肠杆菌和乳酸杆菌数量的比较。试验研究了一窝12头健康仔猪不同日龄、不同肠段食糜中乳酸杆菌和大肠杆菌的数量。结果表明:空、回肠食糜中的大肠杆菌随日龄增加而增加,乳酸杆菌断奶前随日龄增加而增加,断奶后减少;盲、直肠食糜中大肠杆菌和乳酸杆菌数均较为稳定。提示,断奶对仔猪小肠中的微生物数量影响较大,大肠杆菌大量增殖而乳酸杆菌减少,但对仔猪大肠中的微生物数量影响不大。 第二部分:仔猪肠道食糜中乳酸菌和大肠杆菌的分离和鉴定。本试验从仔猪肠道食糜中分离并鉴定获得了五株乳酸菌,分别为L1,多粘芽孢杆菌(B.polymyxa);L2,干酪乳杆菌(L.casei);L3,乳球菌(Lactococcus sp.);L5,芽孢乳杆菌(Sporolactobacillus sp.)和L7,德氏乳杆菌德氏亚种(L.delbrueckii subsp.delbruecki)。同时分离并鉴定了一株大肠杆菌,编号E1。 第三部分:猪源乳酸菌产乳酸能力及抑菌特性的研究。体外厌氧发酵结果表明:L5菌株产乳酸速度最快,pH值下降最快,发酵终末乳酸含量最高,pH值最低。抑菌试验结果表明:5株乳酸菌对大肠杆菌K88、K99、987P、O141、大肠杆菌E1及金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑制作用;低pH值条件下抑菌效果显著;排除酸影响后仍有22%~53%抑菌效果;抑菌物质具有热稳定性并对蛋白酶不敏感。 第四部分:模拟胃肠环境因素对猪源乳酸菌存活的影响。本试验研究了模拟胃肠环境因素对L5和L7存活能力的影响,以及L5的耐热特性。结果表明,pH值超过2.5处理150min时,L5的存活基本不受影响,pH1.5时L5能在30min内维持较高的存活率;L7耐酸能力相对较差,只能耐受pH3.5和4.5。L5和L7的生长均受胆盐的抑制,在0.1%胆盐条件下,两菌株4h后存活率分别为21.80%和29.06%;当胆盐浓度高于0.2%时,两菌株4h后存活率不超过0.18%。1%胃蛋白酶对L5、L7的生长繁殖无影响。50℃热处理对L5的存活无影响,80℃以上即显著影响其存活率。
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