栆花蜜中抗氧化成分的提取、测定及其活性研究

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蜂蜜为蜜蜂科昆虫中华蜜蜂(Aips cerana Febricius)或意大利蜂(Aips melliferaLinnaens)采集植物花蜜或分泌物,经过充分酿造而贮藏在巢脾内的甜物质,具有很高的营养价值,对心脏病、癌症、白内障的发病率以及不同程度的炎症和免疫系统低下具有有效的减轻作用。枣花蜜为我国众多大宗商品蜂蜜中的一种,提取物对超氧阴离子自由基、羟基基自由基、脂质过氧化自由基和人体血清脂蛋白氧化修饰具有清除作用。本文从枣花蜜中抗氧化活性成分的提取、组成等以下几个方面进行了分析和研究。1.枣花蜜溶解条件的确定。比较了在超纯水和酸水溶解条件下,枣花蜜中抗氧化成分的提取率和DPPH自由基的清除率,结果显示:选用pH为2的酸水溶解,枣花蜜中抗氧化成分提取率为9.0±0.2mg/10g蜂蜜,DPPH自由基清除率为60.3±0.1%。2.枣花蜜中抗氧化成分提取柱材的选择。采用了AB-8、XAD-2、D101和聚酰胺四种柱材进行静态吸附提取,结果表明,XAD-2对枣花蜜中抗氧化成分的吸附率和解吸率分别为76.7%、97.1%;且解吸物对DPPH自由基清除率为51.9±0.5%,显著高于其他三种树脂。因此选定XDA-2树脂作为富集蜂蜜中抗氧化成分的最佳柱材。3. XAD-2树脂动态吸附和解吸条件的优化。考察了蜂蜜/树脂、吸附流速对吸附的影响;洗脱剂浓度、解吸流速、体积对解吸的影响。通过抗氧化成分对DPPH自由基清除率的比较,确定XAD-2树脂最佳吸附和解吸条件为蜂蜜/树脂1:1,吸附流速1.0mL/min,洗脱剂80%乙醇,解吸流速4.0mL/min,洗脱体积2BV。4.枣花蜜活性成分的抗氧化性研究。利用HPLC-DPPH研究了枣花蜜中对DPPH自由基具有清除作用的活性成分;通过DPPH自由基清除实验考察了已知成分的活性强弱。结果表明:枣花蜜中存在12种对DPPH自由基有清除作用的活性成分,其中4种是已知化合物——咖啡酸、对香豆酸、山奈酚和柚皮素,各成分对DPPH自由基的清除能力存在明显差异,山奈酚IC50为59.01±0.41μmol/L,咖啡酸IC50为69.37±0.33μmol/L,对香豆酸和柚皮素对DPPH清除能力较弱,其差异与分子结构密切相关。5.枣花蜜中5种已知成分的含量及抗氧活性。HPLC测定含量显示,白杨素含量最高、柚皮素次之,对香豆酸和山奈酚含量相当,咖啡酸含量最低。以DPPH自由基清除为评价指标,结果显示白杨素对DPPH自由基没有清除能力,其他四种成分清除能力存在差异。6.枣花蜜中未知抗氧化成分的富集、纯化。应用丙酮提取枣花蜜中的抗氧化成分,提取率达到3.6±0.5mg/100g蜂蜜,提取物对DPPH自由基的清除率高达94.7±0.1%,其主要抗氧化成分为HPLC-DPPH实验中的1#吸收峰,峰面积达到49.2%。经过LH-20凝胶柱层析分离,得到纯度更高的1#吸收峰,峰面积高达89.4%。
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