长链非编码RNALOC366613通过调节miR-532-5p/PTEN轴减轻脑缺血损伤

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背景:脑梗死(CI)是中国的主要死亡原因之一,其特点是死亡率、致残率、复发率高,80%以上的脑卒中是由脑组织缺血和缺氧坏死引起,减少脑缺血损伤的最有效方法是恢复受损组织的血液灌注。然而,在血流恢复的过程中,可能会产生过量的自由基,导致缺血再灌损伤(ischemia/reperfusion(I/R)injury)。神经细胞功能障碍和炎性反应在缺血性脑梗死中起着重要作用。因此,认识神经元凋亡和炎症机制可能是脑损伤预防和辅助治疗的额外策略。最近的研究表明,LncRNAs调节重要的生物学过程,表现为细胞增殖、存活、凋亡和分化等。本研究的目的是探索LncRNA LOC366613对脑缺血再灌损伤损伤的影响,研究其相关的机制。方法:采用短暂性大脑中动脉闭塞(MCAO)建立C57BL/6 J小鼠脑缺血再灌注模型,用2,3,5-三苯基四氮唑氯化物(TTC)测定脑梗死体积。利用PC12细胞系建立体外氧糖剥夺(OGD)损伤模型。MTT法被用于测定细胞活力,qRT-PCR法评估测定RNA水平。Western免疫印迹法检测蛋白表达水平。采用TUNEL法和流式细胞技术检测细胞凋亡。最后,使用RNA pull-down实验和荧光素酶活性实验测定来检测miR-532-5p和LOC366613之间的相互作用,以及miR-532-5p和磷酸酶和张力蛋白同系物(PTEN)之间的相互作用。结果:1.LOC366613在脑缺血再灌损伤患者中出现过度表达。2.在PC12细胞中,敲除LOC366613可降低细胞凋亡率和乳酸脱氢酶(LDH)表达,同时提高细胞存活率。3.此外,正如预测的那样,miR-532-5p是LOC366613的靶基因。miR-532-5p的下调逆转了LOC366613基因敲除对PC12细胞凋亡、LDH释放和细胞活力的影响。而PTEN则被证实为miR-532-5p的靶点。4.LOC366613通过调节miR-532-5p/PTEN轴参与脑缺血再灌损伤损伤,可能提供新的脑梗死治疗靶点。
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