绿豆中清热解毒成分的提取及稳定性的研究

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以绿豆为原料,乙醇粗提,两相萃取。利用萃取物进行了抑菌、体内外清除内毒素实验、解热试验,并对萃取物的成分进行分离制备,对成分进行定性。采用乙醇冷凝回流萃取得到总提取物,通过显色基质鲎试验法证明绿豆提取液具有清除细菌内毒素的作用,并以内毒素清除率为指标确定最佳提取条件为70%乙醇,料液比1:20,温度60℃,提取时间2h;总提取物依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,萃取物经鲎试验证明正丁醇萃取物为有效萃取物,内毒素清除率为78.90%。抑菌实验。总提取物和正丁醇萃取物对枯草芽孢杆菌、白色葡萄球菌、大肠杆菌、青霉有不同的抑制作用,其中正丁醇萃取物抑菌活性最强,并确定正丁醇萃取物的最小抑菌浓度:大肠杆菌0.85mg/ml、枯草芽孢杆菌0.79 mg/ml、白色葡萄球菌0.59mg/ml、青霉35.32mg/ml。且抑菌活性在温度30℃~70℃,pH值7.0~8.0的条件下都具有较好的抑菌稳定性,不受紫外线照射的影响。清热解毒作用研究。气相色谱外标法测定正丁醇萃取物的正丁醇残留量0.0236%;浓度为10mg/ml、100mg/ml正丁醇萃取物,能显著降低小鼠的死亡率,延长生存时间,与内毒素组相比有极显著性的差异(P<0.01);浓度为1mg/ml,与内毒素组比较有显著性差异(P<0.05);对存活小鼠血清、肝脏、脑中SOD活力和MDA的含量进行测定。结果表明浓度为10mg/ml、100mg/ml正丁醇萃取物能极显著提高小鼠体内SOD活力,降低MDA的水平,与内毒素组比较(P<0.05);浓度为1mg/ml时,能显著性降低MDA的水平(P<0.05);同时对内毒素致热小鼠发热进行解热试验,给药1h后测定肛温,浓度为1.0%和0.6%时,与模型组比较呈现显著性差异(P<0.05),给药2h后,0.2%的正丁醇萃取物较模型组也表现出显著性差异(P<0.05)。正丁醇萃取物的组分分离制备。薄层层析筛选出展开剂乙酸乙酯:正丁醇:水:醋酸=4:1:1:1时,分离5种组分;用乙酸乙酯:正丁醇=4:1、乙酸乙酯:正丁醇:醋酸=20:5:3进行硅胶柱梯度洗脱,分离出组分F01(产率20.12%)、F02(产率15.35%);残留液过聚酰胺层析柱,60%乙醇进行洗脱,得到组分F03(产率12.56%);残留液进一步用TLC制备得到F05(产率16.05%);各组分经薄层层析确定各组分为单一组分,熔点为:正丁醇247.3~261.5、F01,259.8~265.9、F02,281.6~287.5、F03,284.1~291.3、F05,196.0~201.6。通过薄层染色反应,确定F02为黄酮;F04、F05是皂苷。稳定性试验。正丁醇萃取物极易潮解;温度对F01、F02、F04组分含量影响较大,当温度超过70℃,含量急剧下降,只有在温度50℃以下时,含量基本保持不变,F03在温度超过100℃时,才对其成分造成破坏,性状无变化;各组分不受紫外线照射影响,在pH值5.0-9.0范围内比较稳定。其中F01耐酸性较强。
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