论文部分内容阅读
目的对同时服用普伐他汀与依那普利后出现横纹肌溶解症的机制进行初步探讨。方法1.对一例同时服用普伐他汀与依那普利导致横纹肌溶解症的临床病例进行分析。2.建立同时测定普伐他汀、依那普利、依那普利拉的HPLC-MS/MS方法：30μL血浆样品经蛋白沉淀处理后取上清液,以甲醇-0.1%甲酸水溶液(75：25,V:V)为流动相,流速为1 mL·min-1,经Agilent HC-C18 (4.6×250 mm,5 μm)色谱柱进行洗脱分离。采用Agelent 6460型三重四级杆串联质谱仪,电喷雾离子源(ESI源),多反应监测(MRM),正离子方式检测。用于定量分析的离子反应分别为m/z 447.0→326.8(普伐他汀钠)、m/z 377.2→234.2(依那普利)、m/z 349.2→206.2(依那普利拉)和m/z 285.0→192.9(内标,地西泮)。3.药动学实验：取18只Wistar雄性大鼠,随机分为三组：普伐他汀(PV)组(普伐他汀钠20mg·kg-1, i.g.)、依那普利(EN)组(马来酸依那普利30 mg·kg-1, i.g.)、普伐他汀与依那普利联用(PV+EN)组(普伐他汀钠20mg·kg-1、马来酸依那普利30mg·kg-1, i.g.)。单次给药后,取不同时间大鼠血浆,通过HPLC-MS/MS测定普伐他汀、依那普利、依那普利拉的药物浓度。使用DAS2.1.1软件计算血浆中各药物成分主要药动学参数。4.组织分布实验：取24只Wistar雄性大鼠,随机分为两组：普伐他汀(PV)组(普伐他汀钠20mg·kg-1, i.g., Qd)、普伐他汀与依那普利联用(PV+EN)组：(普伐他汀钠20 mg·kg-1、马来酸依那普利30mg·kg-1, i.g., Qd)。分别在连续给药的第7、14天末次给药2h后,取大鼠的血浆、肝脏、肾脏与肌肉组织,测定血浆与各组织中普伐他汀的药物浓度,计算普伐他汀在肝脏、肾脏、肌肉组织的摄取率(liver/kidney/muscle-to-blood concentration ratio, Kp)。5.免疫蛋白印迹实验：取36只Wistar雄性大鼠,随机分为三组,空白(Control)组(生理盐水3 mL, i.g., Qd)、普伐他汀(PV)组(普伐他汀钠20mg·kg-1, i.g., Qd)、依那普利(EN)组(马来酸依那普利30mg·kg-1,i.g.,Qd)。分别在连续给药的第7、14天取大鼠肝脏组织,采用免疫蛋白印迹(Western Blotting)法测定大鼠肝脏中Oatp1a4、 Mrp2的蛋白表达量。结果1.普伐他汀与依那普利联用可能是导致该患者发生横纹肌溶解症的原因。2.同时测定普伐他汀、依那普利、依那普利拉的HPLC-MS/MS方法可行。该方法测定普伐他汀的线性范围为1.47～1500 ng·mL-1,定量限为1.47 ng·mL-1,日内、日间精密度(RSD%)均小于8%,准确度(RE%)在-2.37%-4.76%。测定依那普利的线性范围11.72～12000 ng·mL-1,定量限为2.93 ng·mL-1,日内、日间精密度(RSD%)均小于6%；准确度(RE)在-1.62%-1.56%。测定依那普利拉的线性范围11.72～12000 ng·mL-1,定量限为3.91 ng·mL-1,日内、日间精密度(RSD%)均小于6%,准确度(RE%)在-0.94%-4.71%。三种药物稳定性良好(RSD<5%),提取回收率均>90%,不受基质效应影响。3.药动学实验：普伐他汀在(PV+EN)组的药动学参数与PV组相比有显著性变化。其中：Cmax增加了15.28%、AUC0-36h增加了32.11%、AUC0-∞增加了32.40%、MRTo-36h增加了13.41%、MRT0-∞增加了13.59%(P<0.05)；CL、V分别显著性下降了24.89%、18.72%(P<0.05)。相对于EN组,在(PV+EN)组依那普利的Tmax延后了21.52%(P<0.05),其它药动学参数无明显变化(P>0.05)。依那普利拉在(PV+EN)组的药动学参数与EN组相比无明显变化(P>0.05)。4.组织分布实验：(PV+EN)组与PV组相比,连续给药7天,末次给药2h后,血浆中普伐他汀的浓度增加了30.34%(P<0.05),肝脏中普伐他汀的浓度降低了21.91%(P<0.05),肾脏与肌肉组织中普伐他汀的浓度无明显变化(P>0.05)。普伐他汀在肝脏的摄取率降低了33.59%(P<0.05),在肾脏、肌肉中的摄取率无明显变化(P>0.05)。连续给药14天,末次给药2h后,血浆中普伐他汀的浓度增加了25.50%(P<0.05),肝脏中普伐他汀的浓度降低了35.82%(P<0.05),肾脏中普伐他汀的浓度无明显变化(P>0.05),肌肉中普伐他汀的浓度升高了76.41%(P<0.05)。普伐他汀在肝脏的摄取率降低了52.18%(P<0.05),在肾脏、肌肉中的摄取率无明显变化(P>0.05)。5.免疫蛋白印迹实验：与空白组相比,连续给予普伐他汀7、14天后,肝细胞膜摄入型转运体Oatp1a4与外排型转运体Mrp2的表达均无明显差异(P>0.05)。与空白组相比,连续给予依那普利7、14天后,肝细胞膜外排型转运体Mrp2的表达无明显差异(P>0.05),而连续给予依那普利7天后,肝细胞膜摄入型转运体Oatp1a4的表达有降低的趋势,但无显著性差异(P>0.05)；连续给予依那普利14天后,肝细胞膜摄入型转运体Oatp1a4的表达著性下降了34.10%(P<0.05)。结论1.所建立的HPLC-MS/MS方法具有较高的灵敏度,且操作简便、专属性强,能够用于同时测定大鼠血浆中普伐他汀、依那普利、依那普利拉的血药浓度。2.单次联用普伐他汀与依那普利会在大鼠体内产生药动学相互作用,导致普伐他汀的血药浓度升高,清除率降低。3.多次服用依那普利,可使肝脏中Oatp1a4蛋白表达量的下降,从而降低普伐他汀在肝脏中的摄取能力,导致普伐他汀在血浆、肌肉中药物浓度升高。这可能是普伐他汀与依那普利联用导致横纹肌溶解症发生的原因之一。