猪流行性腹泻是一种由病原猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的急性、接触性肠道传染病,其典型症状为呕吐、腹泻与脱水等,严重时可导致仔猪死亡。PEDV属冠状病毒科甲型冠状病毒属成员,是一种带囊膜的单股正链RNA病毒。PEDV自发现以来,对我国乃至全世界养殖业造成巨大经济损失。当下对PEDV的防控措施除了综合性生物安全防控外,主要通过接种疫苗。但随着PEDV快速变异,传统疫苗很难做到高效率的防控。因此,本论文旨在探索一种能够抑制PEDV感染的新型生物制剂,并阐明其在抑制PEDV复制过程中的分子机制,为精准高效防控PEDV感染提供新的思路和理论依据。维甲酸受体相关孤儿受体（Retinoic acid receptor-related orphan receptor gamma,RORy）是核受体家族中的一员,最初发现其主要功能是参与机体发育、自身免疫性疾病以及生理节律的调控,近几年发现RORγ在机体脂类新陈代谢过程中发挥重要作用。已有研究证明RORγ在细胞内作为胆固醇生物合成的靶向主调控因子,在由胆固醇生物合成异常引起的相关疾病中高度激活。随着人们对胆固醇研究的深入,发现其不仅参与细胞中重要的生理活动,而且对于病毒完成自身复制也是不可或缺的。有研究发现,通过清除宿主细胞内的胆固醇可阻断PEDV入侵,而PEDV入胞后胞内脂质水平显著上升。因此我们猜想,一方面,PEDV感染后能够激活胞内胆固醇的生物合成;另一方面,使用RORγ抑制剂能够阻断细胞胆固醇合成从而抑制PEDV复制。基于此假设,我们将通过靶向细胞实验进行验证。首先通过细胞毒性试验选取合适浓度的RORy抑制剂GSK805与XY018作用于IPEC-DQ猪空肠上皮细胞系和Vero猴肾细胞系,再分别感染两种PEDV的分离株（HLJBY与HXLV）,感染完成后检测PEDV的S、N蛋白表达情况。结果表明,两种药物呈现剂量依赖性地抑制病毒蛋白S、N的表达。同时,PEDV感染细胞后,与胆固醇生物合成相关的蛋白,如RORγ、SREBP2、HMGCR等的表达水平均呈现感染浓度与时间依赖性增加。在此基础上,为了明确RORγ抑制剂对胆固醇生物合成的调控作用,在不影响病毒复制的情况下使用GSK805与XY018进行处理,此时,细胞内RORγ、SREBP2、HMGCR等的表达水平呈药物浓度依赖性下降,表明抑制RORγ活性确实能够抑制细胞内胆固醇生物合成,并以此抑制PEDV的复制。为进一步验证上述结果,我们将细胞内RORγ敲除后再感染PEDV,发现病毒蛋白表达水平显著下降,且SREBP2与HMGCR等的表达量也明显下降,将RORγ过表达后得到相反的结果。这些结果明确了 RORγ在细胞内胆固醇生物合成中起的主导作用,以及抑制胆固醇生物合成能够起到显著的抗病毒效果。同时,我们将胆固醇抑制剂25-羟基胆固醇（25-HC）、降血脂药物阿托伐他汀（Atorvastatin）与RORγ抑制剂联合使用以谋求更好的抗病毒效果,但是结果并不理想,只有与25-HC联合用药能够起到更好的抗病毒作用。最后,为了探究RORγ抑制剂在病毒复制周期中哪一阶段发挥抗病毒作用,我们分别在感染病毒前后不同时间点使用RORγ抑制剂进行处理。结果显示只有在病毒感染早期进行干预才能够起到抑制PEDV复制的效果。以上研究表明,通过抑制宿主细胞中RORγ表达,阻断胆固醇生物合成,能够有效抑制PEDV复制。分子机制研究发现,RORγ调控细胞内胆固醇生物合成并影响其他胆固醇合成相关蛋白如SREBP2、HMGCR等的表达。并且,在PEDV侵入阶段,促使宿主细胞中胆固醇含量不足,无法满足病毒入胞的需求,以达到感染早期通过阻断胆固醇生物合成抑制PEDV复制的效果。本研究表明,通过靶向RORγ来调控胆固醇生物合成以抵抗病毒感染的思路具有一定的研究价值,本文也为研发新型生物制剂以防治PEDV感染提供了理论和实验依据。