研究目的哮喘是典型的心身疾病,心理应激在疾病过程中起着重要作用。既往研究显示,情志可引起神经-内分泌-免疫失衡,HPA轴是其主要调节途径之一。心理应激条件下,哮喘气道炎症明显增强,对激素反应性下降;其作用机制可能与糖皮质激素受体表达及功能下调,激素敏感性下降有关。本研究模拟临床情志致病特点,建立心理应激哮喘大鼠模型,通过相关指标检测,揭示心理应激哮喘大鼠HPA轴功能变化情况及其与气道炎症反应的相关性;并通过哮喘宁颗粒对心理应激哮喘大鼠进行干预,观察模型大鼠宏观表征、行为学以及血清、灌洗液、肺组织相关指标变化,探索调肝理肺法对心理应激哮喘大鼠HPA轴及气道炎症的调控作用,阐明调肝理肺法的作用机理和作用环节。研究方法本研究在前期工作基础上,将雄性SD大鼠随机分为正常组、应激组、哮喘组、应激哮喘组、西药组和中药组。并模拟临床情志致病特点,采用卵蛋白混合致敏联合束缚制动的方法,建立心理应激哮喘大鼠模型,从宏观表征、行为学、肺通气功能等客观指标进行模型评价;并通过检测血清、灌洗液内CRH、ACTH、CORT水平,肺组织GR表达及气道炎症因子含量,深入研究模型大鼠HPA轴功能的变化及其与气道炎症反应的相关性。并用哮喘宁颗粒对心理应激哮喘大鼠进行干预,与其余各组相比较,观察血清及BALF、肺组织中相关指标浓度、阳性细胞表达及蛋白表达的变化情况,研究调肝理肺法对心理应激哮喘大鼠HPA轴功能及免疫炎症失衡的调节作用。研究结果1)采用OVA混合致敏联合束缚制动成功建立心理应激哮喘大鼠模型。结果显示应激哮喘组大鼠表现为兴趣减退、毛发晦暗无光泽、便溏、饮食量减少、体重增加缓慢;激发过程中有抓咬口鼻、体腹部皮肤,呛咳、喷嚏及喉中哮鸣音等表现。与正常组相比较,应激哮喘组水平运动、垂直运动得分明显下降(P<0.05,P<0.01);蔗糖水偏好程度、悬吊实验挣扎次数下降(P<0.01);悬吊实验中不动时间明显增加(P<0.01);肺通气功能 PEF、FEF25-75%、FEV0.3/FVC 下降(P<0.05,P<0.01,P<0.01),气道阻力Ri、Re明显升高(P<0.05,P<0.01);静脉血嗜酸粒细胞升高(P<0.01);肺组织炎症细胞浸润明显。与应激组或哮喘组相比,应激性哮喘组的症状、体征和相关指标均明显恶化。2)与正常组比较,应激哮喘组大鼠血清、BALF内CRH、ACTH、CORT及IgE、IL-4、IL-17含量明显增高(P<0.01),IFN-γ含量明显下降(P<0.01)。肺组织中GR阳性表达及含量明显下降(P<0.01);而IL-4、IL-17阳性细胞表达及含量增高明显(P<0.01);IFN-γ阳性细胞表达明显减低(P<0.01),而肺组织IFN-γ含量轻度减低,差异无统计学意义(P>0.05)。与应激组或哮喘组相比,应激性哮喘组的HPA轴及气道炎症相关指标均有不同程度加重。相关性研究显示,CORT与IL-4、IL-17、IgE呈正相关,与IFN-y呈负相关;而肺组织中GR水平与之相反,即与IFN-y含量呈正相关,而与IL-4、IL-17等呈负相关。而CORT含量与心理应激哮喘大鼠行为学指标相关性研究发现,CORT含量与糖水消耗量、糖水比例等呈负相关,而肺组织GR含量与糖水消耗量、糖水比例、翻动次数及水平垂直运动呈正相关;但与静止时间呈负相关,相关性较弱。3)哮喘宁颗粒治疗后,中药组大鼠前期活动减少,反应迟缓,毛发晦暗,后期情绪改善,较为活跃,饮食量增加,对周围事物兴趣增高;激发过程中呼吸频率增快,腹肌收缩加深、加快,时有搔抓头面、体腹部毛发。与模型组相比较,中药组大鼠水平运动、垂直运动得分明显增加(P<0.01);蔗糖水偏好程度、悬吊实验挣扎次数明显增高(P<0.01,P<0.01);悬吊实验不动时间明显降低(P<0.01);肺通气功能中药组大鼠PEF、FEF25-75%、FEV0.3/FVC轻度增高;而Ri、Re减低,差异有显著统计意义(P<0.01);静脉血嗜酸粒细胞明显降低(P<0.01);肺组织中炎症细胞浸润明显减少。中药组大鼠血清、BALF内CRH、ACTH、CORT含量较应激哮喘组明显下降(P<0.01),而肺组织GR阳性表达明显增高(P<0.01),其含量轻度升高,差异无统计学差异(P>0.05)。而血清、BALF及支气管肺组织IL-4、IL-17含量及阳性细胞表达明显下降(P<0.01);肺组织IFN-γ阳性细胞表达明显降低(P<0.01),而含量略有降低,差异无统计学意义(P>0.05)。相关性研究结果显示CORT含量与IFN-γ呈负相关,而与IgE、IL-4、IL-17等炎症指标呈正相关;而肺组织GR含量与IFN-γ水平呈正相关,而与IL-4、IL-17等炎症指标呈负相关。而CORT含量与大鼠行为学相关性研究发现,CORT含量与糖水消耗量、糖水比例、翻动次数及垂直运动次数呈负相关;而与静止时间呈正相关,但相关性均较弱,无统计学差异(P>0.05)。研究结论1)采用OVA混合致敏联合束缚制动成功建立心理应激哮喘大鼠模型,符合支气管哮喘肝失疏泄、肝肺失和证候学特征。2)心理应激通过诱导哮喘HPA轴功能失调,GR表达下调,降低CORT抗炎作用;诱导Th2、Th17免疫偏移,抑制Th1炎症反应,引起Th1/Th2免疫失衡、气道免疫炎症增强,从而促进哮喘发生、发展。3)调肝理肺法可显著改善哮喘心理应激哮喘大鼠焦虑、抑郁程度;同时降低心理应激哮喘大鼠血清、支气管肺泡灌洗液HPA轴相关指标,增加肺组织GR表达,调节Th细胞平衡,降低气道炎症;提示调肝理肺法可能通过调控HPA轴功能,减轻气道炎症反应,从而实现对心理应激哮喘的治疗作用。