药用植物提取物筛选及和厚朴酚对烟草疫霉的抑制作用

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烟草黑胫病是由烟草疫霉(Phytophthora nicotianae)引起的重要病害,严重影响着烟草的产量与质量,流行时可造成毁灭性灾害。生产中多以化学防治为主,但是化学药剂大多存在易残留、易产生抗药性等缺点;植物源杀菌剂因具有低残留、易降解、环保等优点,成为近年来的研究热点,在发展可持续性农业方面具有显著优势和良好的发展前景。以烟草疫霉为主要靶标,本研究开展抑菌植物提取物筛选、和厚朴酚抑菌机理及盆栽防效等相关试验,获得如下试验结果:采用微波-超声萃取法和生长速率法,从8种中药材中提取并筛选出4种对烟草疫霉有显著抑制效果的植物提取物;进一步采用硅胶柱层析技术分离纯化追踪活性物质,通过UPLC-MS/MS技术得到881种化合物,经筛选验证发现和厚朴酚可显著抑制烟草疫霉的菌丝生长。此外,和厚朴酚显著抑制其它8种植物病原菌,其EC50在3.56-33.85μg/m L之间,发现其在马铃薯、茄子、葡萄、樱桃番茄、黄瓜等的保鲜上具有显著效果。通过结晶紫-刚果红染色、扫描电镜和透射电镜观察,菌丝体相关酶活和能量代谢相关指标的测定以及转录组学数据分析等一系列试验,探究和厚朴酚对烟草疫霉的作用机理,结果表明,和厚朴酚破坏烟草疫霉的菌丝形态和细胞壁结构,增加细胞膜通透性,造成细胞内容物外泄,导致糖、蛋白质和相对电导率升高。此外,和厚朴酚增加超氧化物歧化酶(SOD)的活性,造成H2O2积累,导致细胞毒性增强,胞内活性氧(ROS)水平上升;降低过氧化氢酶(CAT)和ATP酶的活性;转录组学分析验证CAT相关基因下调,抑制三羧酸循环代谢通路,导致ROS积累,q RT-PCR进一步证实了结果。采用温室盆栽试验和土壤微生物高通量测序等方法,探究和厚朴酚对烟草黑胫病的影响,结果表明,和厚朴酚降低烟草黑胫病的发病率和病情指数,显著提高对烟草黑胫病的防治效果;和厚朴酚显著降低细菌群落丰富度,降低镰孢菌的丰度,增加假裸囊菌的丰度;同时促进纤维素降解,有利于烟草植株的生长。上述试验为研发和厚朴酚作为广谱性植物源杀菌剂奠定研究基础。
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