经皮腔内冠状动脉介入(PCI)治疗是目前治疗冠心病的主要手段之一,但是介入治疗后再狭窄的发生严重影响了其远期疗效。因此,如何有效防治再狭窄已成为基础研究和临床研究的热点和难点课题。许多研究表明,再狭窄的主要机制是血管损伤局部中膜平滑肌细胞增殖,向内膜迁移及细胞外基质形成引起的内膜增生和血管重构。DIM是I3C的衍生物,I3C属于吲哚类化合物,它具有多种药理学活性。国外学者通过细胞培养发现DIM具有抑制肿瘤细胞的增殖,诱导肿瘤细胞凋亡的作用,而再狭窄与肿瘤细胞在细胞的增殖上有相似之处。近年研究显示DIM可抑制平滑肌细胞增殖,但其作用机制尚未阐明。故我们推测DIM是否也具有抑制VSMC增殖和诱导平滑肌细胞凋亡的作用?能否用于预防PCI后再狭窄?DIM对再狭窄方面的研究尚未见报道。本实验就是通过研究DIM对兔颈总动脉球囊损伤后内膜增生的影响,为此做了一系列实验,旨在探讨其防治RS发生的机制。目的①建立实验兔颈动脉再狭窄模型。评价DIM对血管成形术(PTA)后再狭窄的影响,分析DIM对血管再狭窄的干预作用,为再狭窄的防治提供新的理论依据。②观察PTA术后相关细胞生长因子mRNA水平表达以及DIM对其表达变化的影响。③观察PTA术后,bcl-2在蛋白水平及mRNA水平表达的变化特点,探讨bcl-2在血管再狭窄过程中的作用和意义。④评价DIM在本实验研究中的安全性。方法1动物模型和分组:选用新西兰兔,随机分为假手术组、模型组和大小DIM剂量治疗组共4组。将实验兔右颈外动脉结扎,造成内膜增生、颈动脉再狭窄模型。DIM做成乳剂后予腹腔注射给药。术前3天开始给药,大小DIM剂量组每只兔分别予8mg/kg/d与2mg/kg/d ,腹腔注射给药,假手术组与模型组予等体积的生理盐水。术前3天开始阿司匹林经灌胃给药,50 mg/d,1次/d,持续至动物处死。给药4周后取损伤区域的血管段制备标本,根据HE染色标本情况,进行后续染色及处理。2病理学检查:所有标本行HE染色。对PDGF、TGF-β、VEGF和bFGF采用免疫组织化学染色观察其表达的变化,而bcl-2进行原位杂交实验观察其mBNA表达的改变。3病理学资料图像分析:采用病理图像分析系统对标本HE染色片,在光镜下进行形态学和组织学分析,同时分别计数PDGF、TGF-β、VEGF和bFGF免疫组化染色片和bcl-2原位杂交染色片内膜、中膜,外膜阳性细胞表达率。4通过检测实验兔肝功能及肝肾脏的病理形态变化来评价DIM对动物的安全性。结果1. DIM对PTA术后血管内膜增生和重塑的影响1.1病理改变肉眼可见假手术组颈动脉柔软,有弹性,与周围组织没有粘连,镜下显示内膜光滑完整,无内膜增生,内弹力板完整,中膜平滑肌细胞排列整齐,形态一致,细胞核呈长梭形;模型组动脉成灰白色,僵硬,与周围组织粘连,动脉明显变细甚至闭塞,镜下新生内膜明显增厚,管腔横切面减少,呈偏心性狭窄,内含大量增殖和迁移的血管平滑肌细胞(VSMC)及纤维组织,内弹力板不连续,中膜可见损伤,外膜增厚。DIM小剂量组与模型组没有明显差异,而DIM大剂量组内皮比较光滑完整,内膜增生减轻,管腔明显增大。1.2内膜、中膜和外膜面积的变化HE染色光镜下可见损伤动脉内膜面积和内膜/中膜面积显著增加,提示造模成功。与模型组比较,DIM小剂量组内膜面积、内膜/中膜面积、内膜/中膜厚度都有所降低,但差异不显著(P>0.05),大剂量组则效果明显,具有显著性差异(P <0.01)。中膜与外膜面积没有显著变化。1.3内膜、中膜与外膜厚度的变化与模型组比较,DIM小剂量组内膜厚度与内膜/中膜厚度,都有所降低,但差异不显著(P>0.05),大剂量组则效果明显,差异具有显著性。(P<0.01)。中膜与外膜厚度无明显变化。2细胞生长因子的表达根据免疫组织化学染色的石蜡切片发现,正常组PDGF与TGF-β仅内膜微量表达或没有表达。模型组与治疗组主要在损伤动脉管壁表面及新生内膜表达,中膜有少许表达。模型组PDGF、VEGF、bFGF及TGF-β的明显升高;DIM小剂量组也升高明显,与模型组比没有显著差异(P>0.05);而DIM大剂量组表达明显减少,与模型组比具有显著差异﹙P<0.01﹚。3 BCL-2的表达结果根据原位杂交实验发现,凋亡基因bcl-2在假手术组中只有极少量表达或没有表达,模型组阳性的细胞主要集中在新生内膜,并呈棕黄色,中膜也有表达,其表达明显增加,而DIM小剂量组与模型组没有明显差别﹙P>0.05);大剂量DIM组bcl-2的表达明显减少,较模型组明显改善﹙P<0.01﹚。4 DIM的安全性评价通过检测肝功能的ALT与AST及肝肾的病理变化均没有发现明显病变,而肝肾的重量及大小也无异常改变,因此DIM对动物没有肝肾损害。结论1 DIM可抑制实验兔颈动脉损伤后内膜增生与血管重构,这与其抑制平滑肌增生作用有关。2相关细胞生长因子mRNA基因表达的增加是血管重构的重要机制,抑制其基因表达,是DIM抑制血管重构、防治再狭窄的主要机理之一。3 DIM能够促进实验兔动脉血管成形术后血管局部SMC的凋亡,其作用与下调Bcl一2的表达的表达密切相关。4内膜增殖与血管重塑均是RS形成的主要病理机制,RS形成由内膜增殖与血管重塑的失衡所决定,两者协同导致管腔狭窄。5 DIM对实验动物是安全的。