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动脉钙化(Arterial calcification,AC)与糖尿病、慢性肾脏疾病(Chronic kidney disease,CKD)和老年人的心血管疾病发生率和死亡率相关。研究表明,动脉钙化与骨形成类似,是一种主动调控的过程,在这个过程中血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)分化为成骨样细胞是动脉钙化的重要环节。但是其具体的发病机制尚不明确。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)被认为是基因转录和细胞分化过程中的关键调控因子。先前的研究证实lncRNA影响VSMCs的增殖和凋亡。抗分化非编码RNA(anti-differentiation non-coding RNA,ANCR)是lncRNA的一种,最近的研究表明,ANCR能够抑制人胚胎成骨细胞分化。我们之前体外实验表明,ANCR能够抑制β-甘油磷酸钠(β-GP)诱导的小鼠VSMCs的分化。在本研究中,我们利用体内实验研究ANCR对动脉钙化的作用。本实验的研究目的是探讨lncRNA-ANCR在动脉钙化中的保护作用。C57BL/6雄性小鼠随机分为4组,对照组,维生素D3组,维生素D3+慢病毒ANCR组,维生素D3+对照慢病毒组,除对照组外,其余3组小鼠均注射50万IU/kg/天的维生素D3,对照组小鼠注射相同剂量橄榄油,持续7天。构建ANCR过表达的慢病毒载体,病毒的浓度为5×108TU/ml,慢病毒ANCR经尾静脉注射感染维生素D3+慢病毒ANCR组小鼠,对照慢病毒经尾静脉注射感染维生素D3+对照慢病毒组的小鼠。4周后处死全部小鼠,分离小鼠胸主动脉,制作冰冻组织切片。通过茜素红染色和Von kossa染色显示小鼠胸主动脉的组织结构和钙化灶,通过免疫荧光(immunofluorescence staining,IF)染色评估骨形成蛋白-2(Bone morphology protein-2,BMP-2)、Runt相关转录因子2(Runt related transcription factor 2,Runx2)的表达,并应用Image J软件测量统计、Graphpad Prism7.0进行数据分析。茜素红染色显示:皮下注射维生素D3后的3组小鼠胸主动脉中层出现不同程度的橘红色钙化结节,动脉管壁中弹性纤维排列紊乱,与对照组相比,失去完整的动脉管壁结构。Von kossa染色显示:3组小鼠胸主动脉中层出现不同程度的黑色钙化结节,对照组没有显示出钙化结节。数据分析结果显示:与对照组相比,维生素D3组和维生素D3+对照慢病毒组有显著的动脉钙化形成,差异具有统计学意义(p<0.001)。而与维生素D3组和维生素D3+对照慢病毒组相比,维生素D3+慢病毒ANCR组动脉钙化显著减弱,差异具有统计学意义(p<0.001)。免疫荧光染色显示:4组小鼠胸主动脉中均有不同程度的Runx2和BMP-2的表达。数据分析结果显示:与对照组相比,维生素D3组和维生素D3+对照慢病毒组中Runx2和BMP-2的表达显著增加,差异具有统计学意义(p<0.05)。而与维生素D3组和维生素D3+对照慢病毒组相比,维生素D3+慢病毒ANCR组中Runx2和BMP-2的表达显著减弱,差异具有统计学意义(p<0.05)。因此,我们可以得到结论ANCR可能在动脉钙化中发挥保护作用,从而为防治动脉钙化的发生和发展提供新方向。ANCR可能通过负向调控VSMCs的成骨样分化而减弱动脉钙化。