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目的本研究通过沉默Twist基因,观察其对人结肠癌细胞系HCT1l6在体内的成瘤以及转移的影响,对E-cadherin和Vimentin基因转录和蛋白表达的影响,探讨Twist基因在EMT现象中的作用,及其与结肠癌发生、发展和转移的关系。方法本研究使用不作处理、空质粒(pGenesil1.2)和重组质粒(pGenesil1.2-Twist-shRNA)转染的结肠癌HCT116细胞系,采用脾被膜下注射法建立裸鼠脾脏结肠癌种植自发肝转移模型,根据注射细胞不同,实验分为3组：A.空白组(未作处理肿瘤细胞系);B.空质粒组(空质粒转染肿瘤细胞系)；C.沉默组(重组质粒转染肿瘤细胞系)。种植肿瘤后,观察裸鼠的体重及饮食和营养情况,注射30天后取裸鼠模型肝脏和脾脏标本并观察脾脏和肝脏成瘤情况,应用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测各组脾脏种植肿瘤和肝脏转移肿瘤组织中Twist及其相关特征性分子标志物的转录和表达情况。结果1.成功建立裸鼠结肠癌细胞脾被膜下注射移植肝转移模型,沉默组与空白组和空质粒组裸鼠脾脏种植瘤大小相仿,肝脏转移肿瘤数量减少,转移瘤大小无明显差异。2.沉默组较空白组和空质粒组脾脏种植肿瘤组织中Twist、Vimentin基因转录水平均较低,分别减少49.3%、36.5%(p<0.05),而E-cadherin基因转录水平高2.49倍(p<0.05)；Twist、Vimentin蛋白表达水平均较低,分别低45.1%、32.9%(p0.05),而E-cadherin蛋白表达水高2.27倍(p<0.05)。3.肝脏转移肿瘤组织较脾脏种植肿瘤组织的Twist基因转录水平高1.26倍(p<0.05),Twist蛋白表达水平高1.24倍(p<0.05)。结论1.通过脾脏注射肿瘤细胞建立结肠癌细胞肝脏转移模型是可行的,且成功率较高。2.通过沉默结肠癌细胞系HCT116的Twist基因,可以降低体内转移瘤的形成,Twist基因与肿瘤的生长并无明确的关系。3.通过沉默结肠癌细胞系HCT116的Twist基因,可以抑制脾脏种瘤肿瘤组织中的Twist、Vimentin基因的mRNA的转录水平和蛋白表达水平,提高E-cadherin基因的mRNA转录水平和蛋白表达水平。4.在体内转移肿瘤灶中Twist基因的转录和蛋白表达水平高于种植灶,Twist基因可以促使肿瘤转移的发生。5.沉默结肠癌HCT116细胞系Twist基因可在体内成功表达,一定程度逆转EMT现象,证实通过抑制Twist基因这一途径治疗结肠癌转移具有可行性。