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背景:椎间盘退行性病变(Intervertebral Disc Degeneration,IVDD)已成为临床上常见的脊柱退变性疾病,主要表现为下腰痛及神经根病变,严重影响人们的生活和工作。但目前的主要治疗手段均属对症治疗,尚无有效的延缓或逆转椎间盘退变的治疗方案。软骨终板细胞中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)的表达及炎症的发生是终板退变的原因,也被认为是导致椎间盘退变的主要原因。蜂毒肽(Melittin)是从蜂蜜(西方蜂蜜)中提取的一种多肽,由于其具有延缓软骨退变的功效,从而被广泛地应用于中国、韩国及日本的传统医学中。研究表明,Melittin可以通过抑制NF-κB信号通路转导从而下调MMP的表达。因此,如果能实验证明Melittin能够通过抑制终板软骨细胞(Endplate Chondrocytes,EPCs)中MMP表达延缓其退变,进而抑制椎间盘退变,这就为Melittin在预防椎间盘退变方面提供了可能性。目的:建立大鼠EPCs细胞的体外自然传代的退变模型;观察大鼠EPCs的细胞学特性及生物学特性;对比大鼠退变EPCs与正常EPCs的形态学及Ⅱ型胶原蛋白表达差异;研究Melittin对大鼠EPCs中MMP表达的抑制情况。方法:1.无菌条件下取大鼠腰椎的终板软骨组织,用Ⅱ型胶原酶消化分离椎间盘终板软骨组织后培养,胰蛋白酶消化后传代培养;2.选取P1代及P5代使用倒置显微镜观察细胞形态,并行甲苯胺蓝染色及免疫荧光染色来对其进行鉴定;3.使用MTT法确定Melittin对于大鼠EPCs的最适浓度;4.随机选取P1代及P5代细胞进行实验分组:A.P1代空白对照;B.P1代+最适浓度的Melittin;C.P5代空白对照;D.P5代+最适浓度的Melittin;5.对干预后的四组细胞使用蛋白印迹分析法(western blot)检测MMP-3蛋白的表达情况。结果:1.培养出的EPCs传代后逐渐由多角形变为梭型;2.甲苯胺蓝染色细胞质中的酸性粘液物质(如蛋白多糖)则被染成深蓝色,免疫荧光染色标记Col-2,可见细胞骨架部分明显阳性表现(呈绿色荧光),P5代较P1代Col-2表达明显减弱,以上所见可证明所培养细胞为软骨细胞;3.MTT法测定Melittin的最适浓度为1μg/ml;4.蜂毒肽对于退变EPCs中的MMP蛋白的表达有抑制作用,并能够延缓终板软骨退变,表现为B、D较A、C组MMP蛋白表达明显减弱,B组较D组MMP蛋白表达明显减弱,其差别具有统计学意义(p<0.05)。结论:Melittin能够抑制EPCs中MMP的表达,从而具有一定的终板软骨保护作用,为防治脊柱退变性疾病提供一定的实验依据。