论文部分内容阅读
本文建立了一种新型的基于核酸适配体的试纸条快速检测技术,并首次用于水中的黄曲霉毒素B1的检测,该技术的实现主要基于黄曲霉毒素B1和DNA探针对适配体的竞争反应。核酸适配体是人工合成的单链DNA或RNA,能与多种物质特异性结合且特异性强,利用核酸适配体代替传统胶体金侧流免疫层析技术中的抗原抗体,可以使试纸条快速检测技术的应用范围更广,灵敏度更高;纳米金粒子在大量聚集时呈现红色,肉眼可见,即可以实现试纸条的现场实时检测。(1)纳米金粒子的制备和纳米金粒子与核酸适配体的偶联。本实验通过Frens法制备纳米金粒子,考察了转速、反应时间和还原剂添加量,并利用紫外光谱法、透射电子显微镜等手段进行纳米金粒子的表征。核酸适配体末端修饰巯基,巯基可以与纳米金粒子形成共价键,在纳米金粒子与核酸适配体偶联时利用柠檬酸三钠并调节pH的方法,将偶联的时间从使用氯化钠陈化的1-2天缩短为3-4个小时,并利用热重分析核酸适配体在纳米金粒子表面上的连接量在7 wt%左右。(2)试纸条优化并检测黄曲霉毒素B1。本试验考察了纳米金-核酸适配体添加量、封闭剂、硝化纤维膜和链霉亲和素的种类,并通过免疫色谱读取仪测定吸光度,最终确定黄曲霉毒素B1的肉眼检测限为10ng/mL,免疫色谱读取仪的检测限为1.05ng/mL,线性范围为1-50000ng/mL。加标样品的回收率在107.26%-116.59%,相对标准偏差范围在2.95%-4.73%之间。与此同时,选取黄曲霉毒素B1的结构类似物,验证了该试纸条的特异性,说明此方法可用于检测实际水样品中的黄曲霉毒素B1。最后通过圆二色谱的方法定性考察了黄曲霉毒素B1与核酸适配体之间的相互作用。本实验基于核酸适配体的试纸条快速检测技术为检测水中的黄曲霉毒素B1提供了更低的肉眼检测限和更宽的检测范围,有助于更快的进行现场实时的样品检测。与此同时,为检测不同样品中的黄曲霉毒素B1提供了方法依据。