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石榴具有悠久的栽培历史,在我国被广泛种植。由于石榴具有较高的营养价值和保健功能,近年来石榴越来越受到消费市场的青睐,石榴产业在国内外迅速发展。‘突尼斯软子’石榴抗旱、抗病、栽培适应范围广,但其抗寒性较差,温度低于-10℃时,容易受冻害,抗寒性差制约其在我国范围内的推广和栽培。现代分子生物技术,尤其是植物组织培养和基因工程的发展,为石榴定向改良和新品种选育提供了重要的技术支持;而遗传转化技术的出现使得快速培育石榴抗寒新种质成为可能。本试验以‘突尼斯软子’石榴胚培苗的子叶、叶片、上胚轴和下胚轴为外植体,利用农杆菌介导法进行遗传转化,通过比较GUS瞬时表达率对不同的预培养时间、菌液浓度、侵染时间、共培养时间、AS浓度进行了优化,建立‘突尼斯软子’石榴四种不同外植体的高效遗传转化再生体系;并在此基础上,利用根癌农杆菌介导法将抗寒基因ICE1转入石榴基因组,对转化所得抗性芽进行PCR检测;此外,为解决石榴遗传转化研究中不定芽生根率低的问题,对石榴试管嫁接技术进行初步的研究。主要研究结果如下:1.石榴四种不同外植体遗传转化体系的建立通过比较GUS瞬时表达率,确定了预培养时间、菌液浓度、侵染时间、共培养时间、乙酰丁香酮浓度等的最适处理。结果表明,以子叶为外植体时,预培养3 d,菌液浓度OD600为0.5,常规方法侵染25 min,共培养培养基添加30.0 mg/L乙酰丁香酮,共培养3 d后GUS瞬时表达率最高,为60.0%;以叶片为外植体时,预培养3 d,菌液浓度OD600为0.7,常规方法侵染25 min,共培养培养基添加20.0 mg/L乙酰丁香酮,共培养3 d后GUS瞬时表达率最高,为73.3%;以上胚轴为外植体时,预培养2 d,菌液浓度OD600为0.5,常规方法侵染20 min,共培养培养基添加30.0 mg/L乙酰丁香酮,共培养3 d后GUS瞬时表达率最高,为70.0%;以下胚轴为外植体时,预培养2 d,菌液浓度OD600为0.5,常规方法侵染25 min,共培养培养基添加30.0 mg/L乙酰丁香酮,共培养3 d后GUS瞬时表达率最高,为73.3%。2.农杆菌介导石榴不同外植体转化ICE1基因试验以石榴胚培苗子叶、叶片、上胚轴和下胚轴为外植体,利用农杆菌介导法进行ICE1基因遗传转化研究,试验初步获得大量抗性愈伤组织和少量抗性芽;并对获得的抗性芽进行PCR检测发现没有目的条带;抗性愈伤组织的扩繁和后续试验正在进行中。3.石榴试管嫁接技术研究在石榴遗传转化的研究中发现外植体诱导出的不定芽生长细弱、黄化,不利于生根得到完整植株,而试管嫁接技术能克服无根试管苗生根困难的问题;石榴试管嫁接试验采用改良劈接法,以带四片叶片茎尖(四叶一心)为接穗、根和下胚轴连接体(不带子叶)为砧木的组合是石榴试管嫁接的最佳处理组合,嫁接成活率达70.0%,显著高于其他处理组合。