论文部分内容阅读
[目的]本课题拟通过高通量lncRNA芯片结合生物信息学方法筛选出肝细胞癌细胞中Hint1基因可能调控的特异性lncRNA,结合体外实验探寻其可能的作用靶点或信号通路,明确其作用分子机制,为进一步探讨其作为肝癌检测标志物及治疗靶点的可行性提供初步依据。[方法]1.利用siRNA干扰获得Hint1基因敲减的HepG2细胞,并应用MTT、Transwell及划痕实验验证Hint1基因对肝癌细胞增殖、侵袭和转移能力的影响;2.应用高通量lncRNA芯片检测Hint1敲减前后HepG2细胞内lncRNA的变化,利用生物信息学方法筛选得到感兴趣的特异性lncRNA(lncURHI);3.应用生物信息学方法预测lncURHI的潜在靶micro RNA(miR-455-5p);4.利用Smart Silencer敲减lncURHI表达,并检测细胞内miR-455-5p丰度变化;5.应用MTT、Transwell及划痕实验观察lncURHI共敲减对细胞增殖、侵袭和转移能力的影响。[结果]1.Hint1的敲减可抑制HepG2细胞的增殖、侵袭和转移能力;2.Hint1敲减后胞内lncURHI表达显著降低;3.生物信息学预测提示miR-455-5p与lncURHI存在潜在的MRES;4.LncURHI的敲减可显著提高Hint(-)HepG2细胞内miR-455-5p丰度,但无法恢复到Hint1敲减前水平;5.Hint1及lncURHI共敲减后细胞增殖、侵袭和转移能力低于Hint1单一敲减细胞,但高于未敲减细胞。[结论]1.HCC细胞中lncURHI可能通过MREs“募集”细胞内的miR-455-5p,调节细胞内miR-455-5p的丰度,影响HCC细胞的增殖、侵袭转移能力;2.HCC细胞中抑癌基因Hint1通过调节细胞内lncURHI表达调控细胞的增殖、侵袭转移能力可能是其发挥抑癌作用的机制之一;3.1ncURHI的表达可增强HCC细胞增殖、侵袭转移能力。