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1.目的明确与原发性肝细胞癌(肝癌)根治性切除术后早期复发密切相关的临床病理危险因素,探讨GPC3(磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3)表达与肝癌术后高危复发的关系。2.方法回顾性分析广东省人民医院肝胆外科自2003年1月至2007年1月收治住院、并接受根治手术、术后病理证实为原发性肝细胞癌患者的临床病理资料,随访日期截止2009年1月,随访终点为肿瘤复发。根据肿瘤复发时间将患者分为早期复发组及非早期复发组。早期复发指肿瘤肝内复发时间在术后一年以内；非早期复发指术后随访2年内未见肿瘤复发或转移。共有57例患者入选本研究,其中早期复发组29例,非早期复发组28例；分析比较两组患者的各项临床病理资料,包括11项一般临床因素(性别、年龄、HbsAg. HbeAg、HCV、HBV DNA Child分级、AFP、ALT、肝硬化,围手术期输血)及8项肿瘤因素(肿瘤直径、肿瘤数目、卫星结节、淋巴结转移、微血管侵犯、门静脉侵犯、包膜侵犯、Edmonson分级)；通过单因素分析,明确与肝癌早期复发相关的临床病理危险因素。我们前期研究工作利用Affymetrix U133 plus 2.0芯片在全基因组范围内比较了10例术后1年内复发及10例术后超过2年未复发的两组肝癌患者基因表达谱的差异,发现GPC3基因在早期复发组中表达明显上调,接近4倍,这提示其表达上调可导致肝癌细胞的侵袭性显著增强、与肝癌早期复发密切相关。本研究采用实时荧光定量RT-PCR法(real time RT-PCR)和免疫组化法,分别在nRNA和蛋白质水平验证GPC3在早期复发组和非早期复发组患者肝癌组织中的差异表达。将GPC3阳性表达作为候选危险因素,与单因素分析显示的与肝癌早期复发相关的临床病理危险因素一起,进入logistic多元回归分析,明确与肝癌早期复发密切相关的独立危险因素。采用SPSS13.0统计分析软件进行统计分析。计数资料采用卡方检验,计量资料采用两个独立样本t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。3.结果3.1.早期复发相关临床病理危险因素的单因素分析单因素分析显示早期复发组与非早期复发组比较有四项指标差异有显著性,分别是：合并肝硬化(P=0.022)、肿瘤直径大于5cm(P=0.000)、存在肿瘤微血管侵犯(P=0.022)和术前ALT水平升高超过两倍(P=0.003),这些指标可能与肝癌术后早期复发密切相关。3.2.实时荧光定量RT-PCR法检测GPC3在肝癌细胞中的表达实时荧光定量RT-PCR法示早期复发组中GPC3相对表达量为(3.977±0.676),非早期复发组为(3.503±0.926),早期复发组中GPC3的相对表达量高于非早期复发组,其差异有统计学意义(t=2.213,P=0.031)。3.3.免疫组化法检测GPC3在肝癌细胞中的表达在正常肝组织中GPC3呈阴性表达；57例肝癌标本中,GPC3表达总阳性率为68.42%(39/57)。在早期复发组中,GPC3阳性表达率为82.76%(24/29),而非早期复发组中GPC3阳性表达率只有53.57%(15/28),差异具有统计学意义(χ2=5.617,P<0.05)。GPC3蛋白表达与肝癌的一般临床因素和肿瘤因素无关(P>0.05)。3.4.肝癌根治性切除术后早期复发密切相关的独立危险因素合并肝硬化、肿瘤直径大于5cm、存在肿瘤微血管侵犯、术前ALT水平升高超过两倍,和GPC3阳性表达这五项候选危险因素一起进入logistic多元回归分析,结果显示仅GPC3阳性表达、合并肝硬化以及存在肿瘤微血管侵犯是与肝癌根治性切除术后早期复发密切相关的独立危险因素。GPC3阳性表达的回归系数为1.961(P=0.034),OR值为7.110(95%CI：1.158-43.639)；肿瘤直径大于5cm的回归系数为为2.100(P=0.011),OR值为8.170(95%CI：1.626-41.036);存在肿瘤微血管侵犯的回归系数为2.305(P=0.038),OR值为10.022(95%CI：1.141-88.040)。4.结论(1)GPC3阳性表达、肿瘤直径大于5cm,以及存在肿瘤微血管侵犯是与肝癌根治性切除术后早期复发密切相关的独立危险因素。；(2)GPC3阳性表达与肝癌的一般临床因素及肿瘤因素无关,与肝癌术后高危复发密切相关。