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试验以ICR小鼠胚胎内细胞团(ICM)和原始生殖细胞(PGC)为材料，采用不同培养体系分离克隆胚胎多能干细胞，探讨ICR品系小鼠胚胎多能干细胞分离克隆的基本方法，以及一些因素对其分离、培养、克隆、传代等效果的影响。本试验对ICR小鼠胚胎多能干细胞的建系工作做了初步探索，为胚胎多能干细胞多种属广泛建系的研究打下一定基础，也为小鼠胚胎多能干细胞的深入研究积累经验并提供借鉴。研究结果如下： 1．源于ICR小鼠ICM的ES细胞分离克隆研究 试验以RH-CM为培养基培养处于不同发育阶段的小鼠胚胎，发现由囊胚分离的ES细胞传代后ES集落的出现率显著高于桑椹胚(P＜0.05)，故囊胚更适合作为ES细胞分离克隆的材料。以RH-CM为培养基的试验组ES细胞传代的平均时间间隔为38小时，对照组传代的时间间隔平均为78小时，两者差异是显著的(P＜0.05)。表明RH-CM能够促进ES细胞贴壁增殖和ES集落的形成，有效的维持ES细胞未分化状态。试验中设计的三种培养条件对原代ES集落的形成影响不显著，但对传代后的ES集落的形成和传代的代次有显著差异。其中以MEF作饲养层，添加RH-CM培养基一组效果最好。 血清浓度的高低对胎鼠成纤维细胞和ES细胞的培养过程是有影响的。无血清或低浓度的血清能抑制细胞分裂增殖，使细胞生长出现停滞。血清浓度的适度增加可提高细胞的活力和生长速度，并可延缓细胞寿命。MEF和ES细胞体外培养血清浓度以15％～20％为宜，试验中以MEF、MUE、RMC作饲养层，结果表明：以12.5 dpc的MEF为饲养层，无论是在小鼠ES细胞的原代培养，还是在克隆传代过程中，效果都是最佳的。消化液浓度以0.125％胰酶+0.02％EDTA对ES细胞的损伤力最小，传代后ES克隆出现率最高。 2．ICR小鼠EG细胞的分离克隆研究 本试验以ICR品系小鼠胚胎8.5～15.5dpc PGC为材料，经传代培养，获得能连续而稳定传至6代的，具有胚胎干细胞诸多特性的EG细胞系。因此从一定程度上表明，EG细胞的体外培养和细胞系建成并无绝对的品系依赖性。传代过程中，以0.25％胰酶与0.04％EDTA联合作用效果较好，对EG细胞的综合损伤最小，离散传代后EG细胞活力比较强，EG克隆出现最多，最高传至6代。以ICR品系小鼠PGC为材料分离培养EG细胞，随着传代次数的增多，集落数大大减少，但集落形态越来越趋于典ICR小鼠胚胎多能干细胞的分离克隆研究型的鸟莱状或岛屿状.传代培养的EG细胞对饲养层有依赖性，IcR品系小鼠PGC细胞和由其传代后获得的EG细胞呈明显的群聚性，以单个存在状态的较少.对传2代、4代的EG细胞进行AKP染色，所得的EG细胞为AKP阳性细胞。当EG细胞脱离饲养层悬浮培养，或在衰老的饲养层上延迟培养时，发现EG细胞或单个存在，或聚集成团，形成类似于早期胚胎的囊状胚体结构.当简单胚体贴壁继续培养，可出现不同类型的分化细胞，如神经样细胞，上皮样细胞等，有时可见血管样结构出现.这些分化的细胞或呈区域性的集中在一起，或单个存在.