【摘 要】
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目前,熊去氧胆酸(UDCA)和鹅去氧胆酸(CDCA)作为胆结石疾病医治的主要药物。传统的熊去氧胆酸的获得主要是从熊胆中分离提纯,最近几年,学者们开始探索化学合成熊去氧胆酸法来
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目前,熊去氧胆酸(UDCA)和鹅去氧胆酸(CDCA)作为胆结石疾病医治的主要药物。传统的熊去氧胆酸的获得主要是从熊胆中分离提纯,最近几年,学者们开始探索化学合成熊去氧胆酸法来代替传统的从熊胆中分离提取的方法。熊去氧胆酸制备(化学方法)是以鹅去氧胆酸为起始原料。此外,鹅去氧胆酸是牛黄解毒片等其他药剂配制的主要原料,可以抗菌,消炎,抗热应激性,治疗效果很明显。文中主要的研究工作包括以下几个方面:鹅去氧胆酸的分离提取:经浓缩后得到的膏状物中,鹅去氧胆酸就只占约40%的比例。而其他复杂成分如猪去氧胆酸,熊去氧胆酸等胆酸类物质是与鹅去氧胆酸制备胆红素后的猪胆膏废料结构相近,性质相似的异构体,大大增加了从提取胆红素后的猪胆膏废料中提取鹅去氧胆酸的难度。目前这些膏状物大都被当做废物处理,而处理这些废料需要成本,且对环境有害。本文以此制备胆红素后的猪胆膏废料经浓缩后得到的膏状物为原料,分别探索了衍生化结合重结晶的方法和溶剂重结晶的方法进行分离提纯鹅去氧胆酸。衍生结合重结晶提纯的方法:所用的衍生化试剂是对硝基苯甲酰氯,三乙胺做催化剂,在室温条件下与脱水后的胆酸类物质进行酯化衍生,然后再用溶剂重结晶得到纯的鹅去氧胆酸衍生物,再用氢氧化钠水解,重结晶得到纯的鹅去氧胆酸。溶剂重结晶法:猪胆膏经过氢氧化钠皂化1.5 h后,用乙酸丁酯萃取,自配萃取液洗涤3次,浓缩,用二氯甲烷进行重结晶得到纯的鹅去氧胆酸。整个工艺路线用时不超过10 h,相比现有的从家禽胆汁中提纯鹅去氧胆酸工艺约20~30 h所消耗的时间大大减少,不使用钙盐,镁盐,钡盐,铵盐等有毒有害的沉淀法分离,且本论文探索出了比较简单便捷的工艺把鹅去氧胆酸从成分复杂的猪胆膏废料中提取出来,具有较大的经济效益,并实现了此工艺的工业化。对分析鹅去氧胆酸的方法高效液相色谱-示差折光指数(HPLC-RID)进行了方法学可靠性评估。本实验使用甲醇:乙腈:水:磷酸=250:250:350:0.16(V/V/V/V)为流动相,RID为检测器,鹅去氧胆酸在该流动相体系的溶液稳定性进行了探索。为了评估该方法,验证此分析方法的可靠性。结果表明:鹅去氧胆酸在该流动相体系中溶液稳定性很好,在21 mg/mL-23.5 mg/mL溶液浓度范围内有良好的线性关系,且该方法的重复性即精密度,加标回收率即准确度符合分析要求。衍生化实验:用提纯出来的鹅去氧胆酸甲酯化后,分别以噻呋酰氯,特戊酰氯,烟酰氯,3,5-二甲基苯甲酰氯,2,6-二氟苯甲酰氯,2,4-二氯苯甲酰氯,4-溴-5-氟苯甲酰氯为衍生化试剂,三乙胺为催化剂,合成了鹅去氧胆酸7种酯化类衍生物,使用质谱和核磁共振谱,红外对衍生物进行结构表征。抗菌实验:对7种鹅去氧胆酸衍生物进行了初步的抗菌筛选。本文实验采用琼脂扩散法中的滤纸片法,分别探索了7种鹅去氧胆酸衍生物对枯草芽孢杆菌,大肠杆菌,金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞杆菌等四种菌的抗菌活性。为鹅去氧胆酸类衍生物的抗菌活性研究提供了基础性数据参考。
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