猪链球菌病是养殖场中三大细菌性疾病之一,每年给养殖业带来巨大经济损失,同时该病也是一种常见的人畜共患病,威胁着人类的生命健康。多糖结合苗是目前免疫效果较好的一种疫苗类型,研发链球菌多糖结合苗将会给猪链球菌病的防控带来巨大优势。为了制备链球菌的荚膜多糖,以兽疫链球菌为例,摸索出了兽疫链球菌荚膜多糖的提取方法。先将菌种复苏增菌培养,用0.3%甲醛灭活菌液,加入阳离子活性剂分离多糖与菌体,用旋转蒸发仪浓缩20倍菌液后离心,使菌体沉淀而分离出含多糖的上清液;利用乙醇分级沉降法分别在乙醇浓度为25%（V/V）时沉降大部分的核酸和蛋白质,在80%（V/V）及以上浓度时沉淀全部的多糖,收集沉淀即得粗多糖。采用高温蛋白变性法和脱氧胆酸钠去蛋白法去除蛋白质,过0.22μm除菌膜滤过大分子物质,最后用100 KD超滤管反复滤洗3～5次。通过CTAB测吸光值法测得细菌生长和多糖含量随时间的变化关系,在12 h～16 h之间多糖含量最高。采用苯酚-硫酸法、BCA检测试剂盒、紫外微量分光光度计检测结果显示:多糖的浓度为1.68 mg/ml,蛋白质的含量占0.54%,核酸含量为0.31%,经核磁共振波谱法和扫面电镜鉴定纯化物为链球菌荚膜多糖。本研究成功制备出了兽疫链球菌荚膜多糖,并按此方法可制备链球菌2型荚膜多糖,为链球菌荚膜多糖结合苗的研发提供了基础。为了探究荚膜多糖与圆环病毒VLP偶联物的反应原性,将两种血清型的荚膜多糖通过碳二亚胺（EDAC）交联法与VLP进行偶联,经核磁共振波谱法和扫面电镜鉴定两者发生了交联,通过蛋白单一沉淀法测得偶联比为4:1。选用ICR系小鼠作为试验的动物模型,分为CP2+CPS+VLP偶联物、CP2+CPS+VLP偶联物+FA、CP2+CPS+VLP简单混合、CP2+CPS+VLP简单混合+FA、单纯CP2+FA、单纯CP2、单纯VLP+FA、单纯VLP、单纯CPS+FA、单纯CPS和生理盐水对照组共11组,皮下多点免疫小鼠。采集14 d、21 d、28 d、35 d的血液做相关抗体检测。抗体检测结果显示:对照组和未加完全弗氏佐剂组均未产生抗体,而加佐剂组都有部分抗体产生,其中CP2+CPS+VLP偶联物+FA组总体而言抗体效果较优于其他组。为了探究荚膜多糖与圆环病毒VLP偶联物的免疫原性,对接种了该种疫苗的小鼠做攻毒实验。通过平板计数法测得每毫升菌液中所含细菌数为3.5×10~9CFU,将所含不同细菌数量的菌液腹腔注射小鼠体内观察72 h后小鼠的死亡情况,测得链球菌2型对ICR系小鼠的最大全不致死量浓度为3.5×10~8CFU,最小全部致死量为3.5×10~9 CFU,并进一步实验,通过改良寇氏法计算得链球菌2型的LD50为1.59×10~9CFU。给小鼠接种6种不同类型的含有CP2的疫苗,测35 d的抗体后腹腔注射5倍LD50剂量的菌液,结果表明,生理盐水对照组和未加完全弗氏佐剂组均未产生抗体,攻毒后小鼠均死亡,加佐剂组里部分小鼠产生抗体,攻毒后仍有部分小鼠存活,存活率与抗体阳性率相当,表明产生抗体的小鼠对链球菌2型毒株有一定的保护力。为链球菌多糖结合疫苗的研发提供重要试验数据。