【摘 要】
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目的:通过比较由人多生牙分离获得的根尖乳头干细胞(stem cell from the apical papilla of human supernumerary teeth,SCAP-S)与常见的人恒牙来源的牙髓干细胞(dental pulp stem cell,DPSC)各项细胞生物学基本特性及细胞多向分化能力的差异,来验证多生牙作为根尖乳头干细胞来源的研究价值。使用实时荧光定量PCR对SCA
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目的:通过比较由人多生牙分离获得的根尖乳头干细胞(stem cell from the apical papilla of human supernumerary teeth,SCAP-S)与常见的人恒牙来源的牙髓干细胞(dental pulp stem cell,DPSC)各项细胞生物学基本特性及细胞多向分化能力的差异,来验证多生牙作为根尖乳头干细胞来源的研究价值。使用实时荧光定量PCR对SCAP-S与DPSC成骨相关基因的表达能力进行比较,并通过对SCAP-S成骨诱导前与诱导14天后成骨相关基因表达的变化进行研究,探讨运用SCAP-S进行体外诱导形成硬组织的可行性。方法:1.对福建医科大学附属口腔医院儿童牙科2016-2018三年时间可获得的多生牙数量进行调查统计,分析临床可分离根尖乳头干细胞的多生牙储备量。2.使用酶消法,体外分离培养SCAP-S及DPSC。3.分别测量两种细胞的克隆形成能力,计算并对比。分别对SCAP-S及DPSC进行七天连续测量,绘制生长曲线并进行对比。4.使用流式细胞术对SCAP-S的分子表面标志物进行测量,分析其干细胞类别。5.分别对SCAP-S及DPSC进行成脂及成骨诱导分化,对结果进行定性观察及定量分析,对比两者多向分化能力的差异。6.实时荧光定量PCR测定SCAP-S及DPSC成骨相关基因表达,对比两者差异。实时荧光定量PCR对SCAP-S成骨诱导前、成骨诱导后14天成骨相关基因表达变化进行测定,分析其进行体外诱导成骨的能力。结果:1.三年间,临床上可获得根尖牙乳头的多生牙数量为433颗,拔除多生牙的患者年龄较小,4-10周岁患者占比大。2.SCAP-S较DPSC而言,增殖速率明显更快,活性较强。3.SCAP-S及DPSC两种细胞都具有干细胞自我克隆复制的能力,SCAP-S较DPSC克隆形成数量多,SCAP-S克隆形成能力较强。两种细胞的7天生长曲线均为“S”形曲线,符合干细胞生长趋势,SCAP-S生长增殖能力明显强于DPSC。4.SCAP-S细胞属于间充质干细胞。5.SCAP-S及DPSC两种细胞经体外培养诱导,都具有干细胞能多向分化的特点。两者在经体外诱导后,成脂分化能力无明显差别,而SCAP-S成骨能力显著强于DPSC。6.SCAP-S及DPSC细胞均表达成骨相关基因,具有在体外成骨的良好潜能,两者有不同的优势。SCAP-S细胞体外成骨诱导前后,SCAP-S成骨相关基因表达均上调,具有良好体外诱导成骨能力。结论:多生牙来源的SCAP-S是一种临床样本来源广、具有增殖速度快、倍增量大、具有多向分化能力、体外诱导成骨能力强、成骨相关基因高表达、间充质干细胞来源的优秀种子细胞,具有深入研究的价值。
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