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油菜(Brassica napus)是我国四大油料作物之一,菜籽油更是我国主要的食用植物油。菌核病是油菜的重要病害,它是由核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)侵染植株引起的茎、枝腐烂,导致油菜产量损失。一般年份可致减产5%左右,发病严重年份可导致油菜减产30%或更多。目前,十字花科及其近缘植物中尚未找到抗菌核病基因。因此,育成的油菜品种中还没有对于菌核病表现高抗或免疫的抗病品种。由于缺乏抗病基因资源,油菜菌核病抗病育种遇到了困难,寻找与致病或抗病相关基因,无疑对菌核病的防治有着重要意义。菌核病属于真菌性病害,真菌在侵染植物时首先分泌一种多聚半乳糖醛酸酶(PG), PG对植物细胞壁的降解使其他细胞壁降解酶对其底物的攻击更加容易,并为真菌的生长和发育提供糖源。PGIP,是一种多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白,能够特异性识别并抑制真菌分泌的PG的活性,从而抵抗真菌的侵染。本研究以油菜中抗品系甘蓝型油菜宁RS-1为植物材料,以南京油菜田里收集的核盘菌为致病菌进行研究。研究中构建了经核盘菌诱导后宁RS-1抑制消减cDNA文库；此外,克隆了宁RS-1的BnPGIP基因,构建了BnPGIP-pCABIMA组成型表达载体,并通过半定量PCR技术进行初步分析。研究内容如下：一：本研究以甘蓝型油菜宁RS-1为材料,分别提取经核盘菌诱导前后的宁RS-1叶片RNA,然后纯化mRNA,反转录成cDNA,经过酶解后加接头,接着进行了两次杂交,最后构建了经核盘菌诱导后宁RS-1差异表达的抑制消减cDNA文库,其中正向消减文库是以诱导后的宁RS-1cDNA为tester,以正常的宁RS-1cDNA为driver;反向杂交文库则相反。所构建的文库重组率均达到95%,文库容量均达到2700,表明所构建的文库质量良好,能够满足下一步筛选抗菌核病基因。对随机挑取的克隆进行测序分析,获得了许多跟抗病、代谢有关的基因,如r-谷氨半胱氨酸酶基因,抗真菌蛋白基因,铁蛋白基因,ACC氧化酶基因等,为进一步展开油菜抗菌核病重要功能基因的克隆和鉴定提供了重要基础。二：根据已经报道的油菜PGIP基因序列,设计简并引物,从宁RS-1基因