经典名方华盖散出自宋代《太平惠民和剂局方》,由麻黄、炒苦杏仁、炙甘草、陈皮、蜜桑白皮、赤茯苓、炒紫苏子等组成,具有宣肺解表,祛痰止咳的功效,主治肺感寒邪,咳嗽上气,胸膈烦满,项背拘急,声重鼻塞,头昏目眩,痰气不利,呀呷有声,广泛用于现代临床感冒、咳嗽、哮病、喘证等肺系疾病。本文在保持原方、原剂量、原煎煮方法、原适应证的基础上,通过对华盖散标准颗粒进行制备工艺、质量标准、药效学、安全性评价及体内药代动力学的示范性研究,研制出既符合中医用药规律、保持中药方剂特点,同时满足工业化生产、质量稳定可控的标准颗粒,同时为经典名方现代中药制剂工艺合理性评价提供参考。基于原方医籍记载及文献考据,以多指标含量及指纹图谱的方法为评价指标对华盖散标准汤剂制备工艺参数进行量化,确定了日剂量标准汤剂制法:饮片粉碎成粗粉,取处方18.0 g,加水600 ml,煎煮至420 ml,趁热四层纱布滤过。建立了华盖散标准汤剂指纹图谱测定方法,并采用液相-质谱联用(LC-MS)技术初步指认了 9个主要色谱峰,并进行了药材-制剂匹配与归属。建立了华盖散标准汤剂指纹图谱共有模式,并通过主成分分析模型、聚类分析等化学计量学方法,为汤剂及药材的质量控制提供参考。采用气相-质谱联用(GC-MS)技术对标准汤剂中挥发油进行分析鉴定和比较研究,初步指认了70种化合物,占挥发油总量的98.63%,归属分析结果显示挥发油的GC-MS TIC化学信号主要来源于组方药材麻黄、苦杏仁、陈皮的贡献,为揭示其效应物质基础和配伍机理奠定基础。以标准汤剂为基础,对经典方华盖散的现代提取、浓缩、干燥及制剂等工艺进行系统研究,最大限度保持与传统汤剂物质基础的等值性。以多指标成分含量及色谱指纹图谱为指标,采用正交设计方法对提取工艺进行等度优化,确定现代提取工艺为:处方加10倍、8倍、8倍水分别提取2 h、1h、0.5 h;确定了处方中挥发油包合最佳工艺:每ml挥发油加入8gβ-CD和60 ml水进行研磨,包合30 min,研磨液置冰箱中冷藏24 h,离心,抽滤,40℃干燥粉碎即得,并采用紫外法、红外光谱、气相色谱等进行了挥发油包合物的鉴定,证明β-CD与华盖散油可以形成稳定包合物;首次将纳滤浓缩工艺替代传统浓缩工艺,实现物质的等量传递,减少物料及有效成分的过程损失;以颗粒吸湿率为指标,采用D-Optional混料设计筛选处方辅料最佳配比:乳糖:糊精:可溶性淀粉=1:3:1;以颗粒成型率、休止角等为指标,采用Plackett-Burman及Box-Behnken设计试验对华盖散标准颗粒一步制粒工艺进行优化,确定最佳制粒工艺为:浸膏相对密度1.138(60℃),进料速度47 r.min-1,进风温度75℃,物料温度60℃,风机频率35 Hz,雾化压力0.4 MPa。多批中试研究表明,确定制剂处方科学合理,工艺稳定可控,适宜工业化大生产。根据中药整体成份作用的特点,建立华盖散标准汤剂与标准颗粒的指纹图谱等值性评价方法,建立与处方安全性及有效性关联度高的盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸、橙皮苷及迷迭香酸7个指标成分含量测定方法。通过夹角余弦法、相关系数法和等权比率相似度法对华盖散标准颗粒的指纹图谱相似度进行评价,箱式图法比较其多指标成分含量的相近性,聚类分析表明指纹图谱的相似性不等同于成分含量的相近性,两者结合方可有效控制中药质量。按照国家药品标准要求,建立了较为完善的华盖散标准颗粒质量标准体系。参照《中药、天然药物稳定性研究技术指导原则》,本研究采用模拟市售包装条件的华盖散标准颗粒进行影响因素试验、六个月加速稳定性试验及六个月长期稳定性试验,结果显示本品稳定性良好。本研究为华盖散标准颗粒的包装、贮运以及药品的有效期的确定提供理论依据。通过灌胃方式分别给予大鼠等生药剂量华盖散标准颗粒和标准汤剂,以该经典方君药中主要有效成分盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱为检测指标,对大鼠不同时间点的血样进行检测分析,结果显示,盐酸麻黄碱在0.376～24.041 μg·ml-1范围内线性关系良好,相关系数r为0.9999,最低定量限LLOQ为0.376 μg·ml-1;盐酸伪麻黄碱在0.204～13.080 μg·ml-1范围内线性关系良好,相关系数r为0.9995,最低定量限LLOQ为0.204 μng·ml-1。通过Winnonlin药动学软件对华盖散标准颗粒和标准汤剂主要药动学参数进行拟合,并采用SPSS 19.0统计软件对其进行两个独立样本t-检验和非参数的秩和检验分析。结果显示,华盖散标准颗粒组和标准汤剂组的 AUC(0-t)、AUC(0-∞)、Cmax、Tmax、tl/2z、MRT(0-t)、MRT(0-∞)、AUC_%Extrap_obs、Vz_F_obs及Cl_F_obs等参数均无显著性差异,华盖散标准颗粒盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱的相对生物利用度分别为99.72%、101.04%,提示与标准汤剂比较,华盖散标准颗粒并未发生药效成分的药动学特征改变,可认为华盖散标准颗粒与标准汤剂为两种生物等效制剂。本文选择了能体现处方功能与主治的药效学指标试验,开展华盖散标准颗粒与标准汤剂的主要药效学对比试验,结果显示华盖散标准颗粒与标准汤剂均能延长小鼠咳嗽潜伏期、减少咳嗽次数,增加小鼠呼吸道酚红排泌量,延长豚鼠引喘潜伏期,抑制二甲苯所致的小鼠耳廓急性炎症肿胀,抑制大鼠琼脂肉芽慢性肿胀,增加小鼠血清溶血素抗体生成量以及减弱2,4-二硝基氯苯所致小鼠抑制机体免疫功能的迟发超敏反应等作用。华盖散标准颗粒保留了标准汤剂的功能与主治,显示其止咳、平喘、抗炎、祛痰及免疫调节等作用,试验证明了该标准颗粒与标准汤剂具有等效性。根据《中药注册管理补充规定》的相关要求,开展了华盖散标准颗粒对小鼠的急性毒性试验。结果显示,小鼠单次灌胃给药华盖散标准颗粒LD50为54.309 g生药/kg,即约相当于临床成人日用剂量的211.2倍,揭示本品可以安全使用。本文按照重大新药创制专项“经典名方标准颗粒的研究”(编号:2013ZX09508-105)的总体部署与研究思路,以标准汤剂为基准,建立基于药效学、毒理学、药代动力学的生物学方法及多指标化学成分结合指纹图谱的化学表征方法评价经典名方传承工艺的合理性,为起草“来源于古代经典名方的中药复方颗粒”研究的技术规范和注册标准提供依据,同时也为经典名方的研究与开发提供新思路。